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后悔無(wú)期金蟲 (小有名氣)
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[求助]
5RACE
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| 5RACE彌散 是否可以說明 逆轉(zhuǎn)錄的CDNA沒有問題呢? |

金蟲 (著名寫手)
金蟲 (小有名氣)
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非特異性擴(kuò)增會(huì)導(dǎo)致彌散的帶,但是不能就此判別cDNA質(zhì)量.2輪PCR出帶才是硬道理! 很多人都想判定cDNA質(zhì)量,有兩個(gè)簡(jiǎn)單的方法,1是找個(gè)內(nèi)參基因來(lái)擴(kuò)增以下,在沒有DNA污染的情況下,模板可以在稀釋很多倍(倍比稀釋)30循環(huán)擴(kuò)增出內(nèi)參(高表達(dá)基因),說明cDNA還不錯(cuò)。2 找一個(gè)研究的比較清楚的序列變化小的全長(zhǎng)在2K的基因,選個(gè)合適的濃度,自己去擴(kuò)增一下,能擴(kuò)增出來(lái),說明cDNA全長(zhǎng)性良好。 |
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