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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 5RACE
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后悔無期金蟲 (小有名氣)
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[求助]
5RACE
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| 5RACE彌散 是否可以說明 逆轉錄的CDNA沒有問題呢? |
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grape_vine
金蟲 (小有名氣)
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
后悔無期: 金幣+5 2013-07-11 16:48:17
感謝參與，應助指數(shù) +1
后悔無期: 金幣+5 2013-07-11 16:48:17
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非特異性擴增會導致彌散的帶,但是不能就此判別cDNA質(zhì)量.2輪PCR出帶才是硬道理！ 很多人都想判定cDNA質(zhì)量，有兩個簡單的方法，1是找個內(nèi)參基因來擴增以下，在沒有DNA污染的情況下，模板可以在稀釋很多倍（倍比稀釋）30循環(huán)擴增出內(nèi)參（高表達基因），說明cDNA還不錯。2 找一個研究的比較清楚的序列變化小的全長在2K的基因，選個合適的濃度，自己去擴增一下，能擴增出來，說明cDNA全長性良好。 |
3樓2013-07-04 08:31:23
cxwu10016869
金蟲 (著名寫手)
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- 專業(yè): 植物遺傳學
2樓2013-07-04 07:47:51
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