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關于多肽合成中二硫鍵的問題，著急！ 已有1人參與
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| 各位大俠：本人在做二硫鍵的多肽，總共9個氨基酸，在HPLC分析時，單一的分析環(huán)化前后樣品，略微能分得開（能考到兩個峰靠的很近，但不重合），當把兩個樣品混合后無法分開，就一個峰。后來采用Ellman檢測試劑檢測巰基含量，經過計算后成二硫鍵前為0.0000473，環(huán)化后測得0.00000217.能不說明環(huán)化完成？我找的資料只說怎么測，怎么算，并沒有說達到什么標準為環(huán)化完成。請高手幫忙，謝謝啦！ |
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shale1983
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7樓2015-09-18 10:35:53
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測定總巰基含量時，15 mg蛋白樣品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 緩沖液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。測定自由巰基含量時，15 mg樣品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 緩沖液中，而后加入50 μL Ellman 試劑 （DTNB, 即5,5-二硫基雙2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 緩沖液，4 mg/mL），在25℃條件下保溫反應60 min, 離心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 處測定吸光值，以含Ellman 試劑的Tris-Gly 緩沖液為空白對照。 巰基含量的計算公式如下： SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C 式中：A —除去試劑空白后樣品的吸光度值 D—稀釋倍數(shù) C—樣品濃度（mg/mL） 問題1：上述公式中稀釋倍數(shù)D是怎么算的（具體的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？ 問題2：我測的物質為毛發(fā)固體樣品，二硫鍵含量在350μmol/g附近，此種測試方法是否具有可行性 問題3：由于毛發(fā)樣品中含有非水溶性蛋白，又沒喲測量二硫鍵含量的更好的方法 謝謝了  |
8樓2015-10-07 15:54:15
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