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[求助]
western blot伯樂電泳儀的問題請教！謝謝大家！
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| 本人是WB新手，想請教大家一個問題。最近做的兩次WB電泳時都電泳了1H左右但是連MARKER都沒有跑出孔道。第一次預(yù)跑時是正常的，結(jié)果吃了個飯回來就屏幕上出現(xiàn)了E1的錯誤，查說明書說可能是電路的問題或是BUFFER的問題。今天重配了BUFFER,膠也新做的，沒有出現(xiàn)E1錯誤。但是等了1H了，MARKER還是連孔道都沒有跑出。之前在別人實驗室用的電泳儀做的都很好（都是舊的），現(xiàn)在新?lián)Q了一個實驗室，買的是伯樂的電泳儀及電泳槽（都是新的）。這兩周做BDNF蛋白，濃縮膠是15%的，分離膠是5%的，RUNNING BUFFER是新配的，電泳槽中間的BUFFER也沒過梳子齒的膠了（保證內(nèi)外是閉合的）。跑膠用的是濃縮膠恒壓60。值得注意的是，我今天預(yù)跑時感覺里面有上升的小氣泡，但是點樣完正式跑時就覺得里面的上升的氣泡變少了。我擔(dān)心是膠的濃度高了（以前我們老師用的12%的濃縮膠，不過BDNF的分子量也在15%的范圍）就等了1H，結(jié)果還是沒有變化，就看了下電流。結(jié)果發(fā)現(xiàn)電流很小，就5左右（以前用過別人實驗室的伯樂做轉(zhuǎn)膜沒有這種情況，恒壓80的話，電流就10幾）。關(guān)掉電泳儀后重新試，先設(shè)恒流20，結(jié)果START后它又自動跳成恒壓了。然后恒流還是很小。到底是什么原因啊？下周老板就要結(jié)果了，現(xiàn)在還沒做出來，很急！謝謝大家?guī)兔獯穑? |
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4樓2013-07-13 00:19:00
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
herjasmine(myprayer代發(fā)): 金幣+2, 回答很好，perfect 2013-07-10 08:14:41
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herjasmine(myprayer代發(fā)): 金幣+2, 回答很好，perfect 2013-07-10 08:14:41
| 這個不是電泳儀的問題。是電源的設(shè)定。一般的電源有設(shè)置電壓和電流。然后儀器根據(jù)你設(shè)定的條件及系統(tǒng)電阻來確定電壓的設(shè)置和電流的設(shè)置哪個比較低，然后根據(jù)低的那個輸出。根據(jù)你說的，你可能是電壓和電流的關(guān)系沒有調(diào)好。你如果想跑穩(wěn)壓，就設(shè)置好電壓后把電流設(shè)置到比較高是數(shù)值。如果想跑穩(wěn)流，就把電壓設(shè)置調(diào)高，把電流設(shè)置成你需要的數(shù)值。順便提醒一下，如果你兩塊膠同時跑穩(wěn)流的時候需要把電流數(shù)值加倍。 |
2樓2013-07-10 01:32:32
xiwenhui
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3樓2013-07-10 13:04:03
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