 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1659 | 回復: 6 | ||||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||||
sars37捐助貴賓 (小有名氣)
|
[求助]
關于基因克隆的一些實驗技術問題
|
|||
| 小弟基因克隆新手，用的是限制性內(nèi)切酶和連接，目前遇到兩個問題，一個是用內(nèi)切酶HindIII 和EcoRI 對有目的基因的質(zhì)粒和PCDNA3.1酶切后，回收膠的回收率特別低，切完后看到的條帶還很亮，回收后再電泳就很弱，測濃度發(fā)現(xiàn)只有10ng/ul左右，用的是QIAGEN的QIAEX II 試劑盒，小弟自己分析的原因是，50°水浴之后EP管里液體的顏色不夠黃，也就是PH太高，沒有調(diào)PH，還有一個就是在最后加水溶解DNA的時候水的PH偏酸，沒有調(diào)到8.0。第二個問題是酶切的體系問題，含有目的基因的質(zhì)粒酶切體系是10ul的Tvector，HindIII 和EcoRI各3ul，buffer4ul,共40ul體系，不知道PCDNA應該用什么樣的體系，切多少，好像說連接的時候靶基因?qū)|(zhì)粒的摩爾數(shù)之比要在5-9:1，對這個概念我不是太懂。Tvector濃度是5.6ug/ul，純化后的PCDNA濃度是0.86ug/ul。 |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有182人回復
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 關于克隆技術——pcr產(chǎn)物測序問題
已經(jīng)有16人回復
- western blot實驗技術
已經(jīng)有14人回復
- 免疫組化與免疫熒光方法及常見問題分析
已經(jīng)有325人回復
- 【求助/交流】基因克隆實驗為非目的片段？
已經(jīng)有27人回復
- 【求助/交流】從RNA到cDNA合成再到克隆PCR的實驗技巧和操作細節(jié)問題若干，尋求解答
已經(jīng)有12人回復
- 【專題】PCR實驗技術指南
已經(jīng)有535人回復
gyesang
榮譽版主 (著名寫手)
-
專家經(jīng)驗: +24 - MolEPI: 31
- 應助: 599 (博士)
- 貴賓: 2.689
- 金幣: 24334.9
- 散金: 1088
- 紅花: 88
- 沙發(fā): 2
- 帖子: 2327
- 在線: 623.1小時
- 蟲號: 849017
- 注冊: 2009-09-16
- 性別: GG
- 專業(yè): 細胞信號轉(zhuǎn)導
- 管轄: 分子生物
4樓2013-07-13 15:35:57
gyesang
榮譽版主 (著名寫手)
-
專家經(jīng)驗: +24 - MolEPI: 31
- 應助: 599 (博士)
- 貴賓: 2.689
- 金幣: 24334.9
- 散金: 1088
- 紅花: 88
- 沙發(fā): 2
- 帖子: 2327
- 在線: 623.1小時
- 蟲號: 849017
- 注冊: 2009-09-16
- 性別: GG
- 專業(yè): 細胞信號轉(zhuǎn)導
- 管轄: 分子生物
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
sars37: 金幣+7, ★★★★★最佳答案 2013-07-13 15:49:40
感謝參與，應助指數(shù) +1
sars37: 金幣+7, ★★★★★最佳答案 2013-07-13 15:49:40
|
1. 產(chǎn)物回收后，不用測濃度，到時候連接時，往體系里面多加點片段 2. 你的酶切體系有問題，EcoRI和HindIII酶根本不用這么多 質(zhì)粒 1ug EcoRI 1ul HindIII 1ul Buffer 2ul ----------------------------- 補齊水到20ul 目的基因的T載體，可以多切些，但1ug也足夠了 載體一定要少切，一般400ng足夠了，20ul體系，要充分保證載體被酶切開 |
2樓2013-07-13 15:27:08
sars37
捐助貴賓 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 33.5
- 散金: 6
- 帖子: 57
- 在線: 37.8小時
- 蟲號: 2544220
- 注冊: 2013-07-13
- 專業(yè): 環(huán)境衛(wèi)生
3樓2013-07-13 15:34:20
sars37
捐助貴賓 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 33.5
- 散金: 6
- 帖子: 57
- 在線: 37.8小時
- 蟲號: 2544220
- 注冊: 2013-07-13
- 專業(yè): 環(huán)境衛(wèi)生
5樓2013-07-13 15:49:21
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿中海洋材料工程專碩330分求調(diào)劑 +7 | 小材化本科 2026-03-18 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +6 | S.H1 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 354求調(diào)劑 +4 | Tyoumou 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿中國海洋大學，生物學，301分，求調(diào)劑 +4 | 1孫悟空 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 +5 | 安全上岸！ 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 化學工程321分求調(diào)劑 +15 | 大米飯！ 2026-03-15 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 085601專碩，總分342求調(diào)劑，地區(qū)不限 +5 | share_joy 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料專碩306英一數(shù)二 +10 | z1z2z3879 2026-03-16 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 070300化學319求調(diào)劑 +6 | 錦鯉0909 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 考研求調(diào)劑 +3 | 橘頌. 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +5 | 大口吃飯 身體健 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +3 | p asserby. 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 梁成偉老師課題組歡迎你的加入 +8 | 一鴨鴨喲 2026-03-14 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料與化工專碩調(diào)劑 +5 | heming3743 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自動化所實習 +6 | Losir 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] [導師推薦]西南科技大學國防/材料導師推薦 +3 | 尖角小荷 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +4 | 奇點0314 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +4 | 學海漂泊 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料工程調(diào)劑 +9 | 咪咪空空 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考研] ［0860］321分求調(diào)劑，ab區(qū)皆可 +4 | 寶貴熱 2026-03-13 | 4/200 |
|