 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2738 | 回復(fù): 27 | |||
zhangwuhui銅蟲 (小有名氣)
|
[交流]
【求助/交流】基因克隆實(shí)驗(yàn)為非目的片段？ 已有16人參與
|
||
|
克隆實(shí)驗(yàn)問題 1、以cDNA為模板做PCR反應(yīng)，得到的產(chǎn)物和預(yù)期的長(zhǎng)度一樣。 2、再用pMD-19載體連接目的片段，之后液體LB（含氨芐）200轉(zhuǎn)震蕩培養(yǎng)1-2小時(shí)，取300微升倒在LB平板培養(yǎng)24小時(shí)左右，以陽(yáng)性菌落長(zhǎng)到直徑1-2毫米為止；再挑3-5個(gè)陽(yáng)性單克隆放大培養(yǎng)24小時(shí)左右。 3、裂解菌體，4°C ，12 000 g ，離心20-30分鐘，得到質(zhì)粒。 4、PCR檢測(cè)所得質(zhì)粒（引物為M13-47, RV-M），得到了目的片段大小的產(chǎn)物（稍長(zhǎng)些）。 5、送質(zhì)粒測(cè)序（使用通用引物M13-47），但是測(cè)序結(jié)果卻是如下其概況：在載體插入點(diǎn)之間的序列BLAST后，顯示為桿菌等細(xì)菌的片段，共送了10個(gè)樣品均是如此（本實(shí)驗(yàn)應(yīng)該是動(dòng)物的序列），看來不是空載，難道是載體連接上了細(xì)菌的一段序列，為什么會(huì)插入細(xì)菌片段呢，而且長(zhǎng)度就這么巧！還是其他什么原因呢，懇請(qǐng)賜教！ [ Last edited by zhangwuhui on 2010-7-29 at 18:31 ] |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有105人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 重金求助基因克隆與功能驗(yàn)證方向 中文摘要350字左右翻譯成英語(yǔ) 急！ 急！ 急！在線等
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 如何從基因組中擴(kuò)增出一長(zhǎng)5kb的片斷進(jìn)行克隆
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 求助！大片段4kb左右基因PCR克隆方法
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 大片段基因克隆
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 請(qǐng)問能不能僅克隆單一基因的一小片段
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 基因克隆問題~~
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】基因克隆實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】求助：做基因克隆表達(dá)的時(shí)候，怎么選基因？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】基因做表達(dá)實(shí)驗(yàn)必須要克隆全長(zhǎng)嗎？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】基因克隆
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】目的基因克隆總不成功
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】只知道基因功能，但不知序列位置，怎樣克隆目的基因
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】求助基因克隆方面的問題解決方案
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于目的基因的克隆
已經(jīng)有12人回復(fù)
stephenreal
至尊木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 10 (幼兒園)
- 金幣: 33673.4
- 散金: 1400
- 紅花: 1
- 帖子: 2962
- 在線: 900.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 332119
- 注冊(cè): 2007-03-25
- 性別: GG
- 專業(yè): 病毒、病毒感染與宿主免疫
別忘了對(duì)照
★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
reasonspare(金幣+2):謝謝分享。 2010-08-03 05:50:12
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
reasonspare(金幣+2):謝謝分享。 2010-08-03 05:50:12
| 千萬別圖省事，在轉(zhuǎn)化時(shí)按照分子克隆的要求，加上載體對(duì)照、陰性對(duì)照（以LB或者SOB代替克隆基因）或無關(guān)對(duì)照（其它基因片段），這樣應(yīng)該能查出原因。而一般人做的時(shí)候，就只轉(zhuǎn)1個(gè)陽(yáng)性的。與其碰運(yùn)氣，還不如嚴(yán)格一點(diǎn)。如果載體對(duì)照甚或陰性對(duì)照也出現(xiàn)你描述的現(xiàn)象，才可以說是污染，不要亂猜，反而費(fèi)時(shí)間。 |
7樓2010-07-27 11:11:14
sunyongle1
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 2638.8
- 散金: 1
- 帖子: 413
- 在線: 103.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 1059232
- 注冊(cè): 2010-07-17
- 專業(yè): 腫瘤發(fā)生
2樓2010-07-25 21:02:34
jhon86
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1259.8
- 散金: 47
- 帖子: 87
- 在線: 191.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 896554
- 注冊(cè): 2009-11-07
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物醫(yī)用高分子材料
3樓2010-07-25 23:03:21
yujiaping1
木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1365.2
- 散金: 10
- 紅花: 5
- 帖子: 1174
- 在線: 66.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 929883
- 注冊(cè): 2009-12-17
- 性別: MM
- 專業(yè): 疫苗學(xué)
4樓2010-07-25 23:28:53
zhangwuhui
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 58.8
- 紅花: 1
- 帖子: 72
- 在線: 71.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 1031585
- 注冊(cè): 2010-05-30
- 性別: GG
- 專業(yè): 發(fā)育生物學(xué)
5樓2010-07-26 19:30:01
canon-ph
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 69.5
- 帖子: 55
- 在線: 5.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 450807
- 注冊(cè): 2007-11-04
- 專業(yè): 植物病理
6樓2010-07-27 11:00:13
zhangwuhui
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 58.8
- 紅花: 1
- 帖子: 72
- 在線: 71.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 1031585
- 注冊(cè): 2010-05-30
- 性別: GG
- 專業(yè): 發(fā)育生物學(xué)
8樓2010-07-27 13:46:13
9樓2010-07-27 15:53:42
毛毛2802
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 47.6
- 帖子: 23
- 在線: 6.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 689500
- 注冊(cè): 2009-01-07
- 性別: MM
- 專業(yè): 植物生理與生化
10樓2010-08-02 23:14:28
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 zhangwuhui 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑 +5 | 家佳佳佳佳佳 2026-03-29 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +9 | 超級(jí)伊昂大王 2026-03-24 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 343求調(diào)劑 +6 | 愛羈絆 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600，專業(yè)課化工原理，321分求調(diào)劑 +5 | 大饞小子 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑 +7 | 楒桉 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 083000學(xué)碩274求調(diào)劑 +8 | Li李魚 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 320分，材料與化工專業(yè)，求調(diào)劑 +9 | 一定上岸aaa 2026-03-27 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +5 | 舊吢 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 339求調(diào)劑，想調(diào)回江蘇 +6 | 烤麥芽 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 352分 化工與材料 +5 | 海納百川Ly 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿上海理工能源動(dòng)力（085800）310分求調(diào)劑 +3 | zhangmingc 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 279 分 求調(diào)劑 +4 | 睡個(gè)好覺_16 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研化學(xué)308分求調(diào)劑 +10 | 你好明天你好 2026-03-23 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +9 | 小蠟新筆 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +8 | 匹克i 2026-03-23 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 341求調(diào)劑 +7 | 青檸檬1 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 崔wj 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0854人工智能方向招收調(diào)劑 +4 | 章小魚567 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +3 | AZMK 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿南航材料專317分求調(diào)劑 +5 | 炸呀炸呀炸薯?xiàng)l 2026-03-23 | 5/250 |
|