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[交流] 定點(diǎn)突變出現(xiàn)的問(wèn)題出現(xiàn)重復(fù)序列

我在做定點(diǎn)突變出現(xiàn)以下問(wèn)題：我想講227位的F突變成S其序列入下圖：

ACCAGAGCCATTCTGCAAAGTGGTTCCSample TextAATGCTCCTTGGGCGGCCATTCTGCAAAGTGGTT
CCSample TextAATGCTCCTTGGGCGGGCCATTCTGCAAAGTGGTTCCTCCAATGCTCCTTGGGCGGTGCCATTCTGCAAAGTGGT
TCCTCCAATGCTCCT
紅色為突變的點(diǎn)，氨基酸突變沒(méi)有問(wèn)題，可是長(zhǎng)度卻重復(fù)了相同的引物長(zhǎng)度4次，不知道哪里出了問(wèn)題~~求解~~

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1樓 2013-07-24 14:22:54

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ccharlien

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20樓: Originally posted by zcf1990 at 2013-07-26 08:26:06
我們實(shí)驗(yàn)室兩個(gè)不同方向的定點(diǎn)突變都碰到這種問(wèn)題，而且是不同的人不同時(shí)間做的反應(yīng)，先前懷疑是反應(yīng)的buffer或者是試劑有問(wèn)題，可是換了之后還是沒(méi)有解決這個(gè)問(wèn)題~~真心希望碰到過(guò)的朋友幫忙解決下，要不然一直在 ...

我覺(jué)得要么是pcr程序問(wèn)題要么是引物的問(wèn)題

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21樓2013-07-26 15:36:27

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personalpc

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5樓2013-07-24 15:24:27

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lxj341401

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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-07-24 16:41:27

PCR過(guò)程中引入的，連續(xù)幾段突變引物，重新挑取其他克隆測(cè)序，肯定有正常突變的。

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8樓2013-07-24 16:20:33

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bullfrog325

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一樓正解, 多挑幾個(gè)克隆就成

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11樓2013-07-24 18:03:38

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8樓: Originally posted by lxj341401 at 2013-07-24 16:20:33
PCR過(guò)程中引入的，連續(xù)幾段突變引物，重新挑取其他克隆測(cè)序，肯定有正常突變的。

不止一次出現(xiàn)，有沒(méi)有辦法抵制這種現(xiàn)象的發(fā)生~~我小老板說(shuō)他做克隆從來(lái)沒(méi)出現(xiàn)這種現(xiàn)象，還說(shuō)他的克隆只挑一個(gè)，而且都是對(duì)的~~

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13樓2013-07-24 20:55:46

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lxj341401

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zcf1990: 金幣+2, 現(xiàn)在重新做，希望能減少這種現(xiàn)象的產(chǎn)生~~ 2013-07-25 08:34:08

引用回帖:

13樓: Originally posted by zcf1990 at 2013-07-24 20:55:46
不止一次出現(xiàn)，有沒(méi)有辦法抵制這種現(xiàn)象的發(fā)生~~我小老板說(shuō)他做克隆從來(lái)沒(méi)出現(xiàn)這種現(xiàn)象，還說(shuō)他的克隆只挑一個(gè)，而且都是對(duì)的~~

...

減少模板和引物的用量，同時(shí)循環(huán)數(shù)減少到20-25循環(huán)。

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14樓2013-07-25 07:50:55

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amalio

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很正常，我也遇見(jiàn)過(guò)！但是一般只插入一段引物，而且有的還是正常的，像樓主這樣的還是很少見(jiàn)！

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15樓2013-07-25 09:33:30

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15樓: Originally posted by amalio at 2013-07-25 09:33:30
很正常，我也遇見(jiàn)過(guò)！但是一般只插入一段引物，而且有的還是正常的，像樓主這樣的還是很少見(jiàn)！

那你有沒(méi)有克服這個(gè)問(wèn)題，據(jù)小老板說(shuō)他做一次對(duì)一次，重來(lái)沒(méi)遇到過(guò)~~

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17樓2013-07-25 17:29:25

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ccharlien

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17樓: Originally posted by zcf1990 at 2013-07-25 17:29:25
那你有沒(méi)有克服這個(gè)問(wèn)題，據(jù)小老板說(shuō)他做一次對(duì)一次，重來(lái)沒(méi)遇到過(guò)~~...

你小老板說(shuō)的也不算夸張了
我做的十幾次定點(diǎn)突變質(zhì)粒也沒(méi)遇到過(guò)你這情況
一般挑三個(gè)測(cè)序至少兩個(gè)是對(duì)的

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18樓2013-07-26 04:48:40

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18樓: Originally posted by ccharlien at 2013-07-26 04:48:40
你小老板說(shuō)的也不算夸張了
我做的十幾次定點(diǎn)突變質(zhì)粒也沒(méi)遇到過(guò)你這情況
一般挑三個(gè)測(cè)序至少兩個(gè)是對(duì)的...

我們實(shí)驗(yàn)室兩個(gè)不同方向的定點(diǎn)突變都碰到這種問(wèn)題，而且是不同的人不同時(shí)間做的反應(yīng)，先前懷疑是反應(yīng)的buffer或者是試劑有問(wèn)題，可是換了之后還是沒(méi)有解決這個(gè)問(wèn)題~~真心希望碰到過(guò)的朋友幫忙解決下，要不然一直在這個(gè)問(wèn)題上糾結(jié)~·

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20樓2013-07-26 08:26:06

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amalio

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我的只是偶爾出現(xiàn)沒(méi)有去管它

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22樓2013-07-27 14:44:22

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王冠傑

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引物合成純度不可能達(dá)到100%，你的小老板運(yùn)氣實(shí)在是太好了。一半多挑幾個(gè)克隆就行。

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23樓2015-05-11 08:37:34

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Evelyn19

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樓主現(xiàn)在有解決這個(gè)問(wèn)題的辦法了嗎

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24樓2015-12-14 11:56:05

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jinshengfang

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我p質(zhì)粒突變也出現(xiàn)了跟樓主一樣的問(wèn)題，我的引物序列重復(fù)了一次，請(qǐng)問(wèn)樓主解決問(wèn)題了嗎？多挑幾個(gè)送測(cè)序就能對(duì)嗎？

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25樓2016-01-05 11:28:46

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