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阿老鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
異硫氰酸胍水浴加熱后溶解，常溫下馬上析出，這是怎么回事？
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最近在做精子DNA提取實驗，采用參考文獻“Methods of sperm DNA extraction for genetic and epigenetic studies”的方法，需配制含 高濃度（5M）異硫氰酸胍的裂解液，發(fā)現(xiàn)將異硫氰酸胍水浴加熱溶解后，拿出水浴鍋，溫度一冷卻下來立馬析出，這是怎么回事？ 裂解液的成分： 5M 異硫氰酸胍 100mM NaCl； 1% SDS； 2% β-巰基乙醇 200ul/ml 蛋白酶K 具體配制過程如下： 由于異硫氰酸胍需水浴加熱，我先配制了含100mM NaCl，1% SDS，2% β-巰基乙醇三種成分的溶液，取2ml配制后的溶液加入1.18g異硫氰酸胍，于65℃水浴中溶解，配制后存在以下兩個問題： 1）如果我不馬上加入蛋白酶K進行消化裂解，而是想將裂解液在常溫下保存，從水浴鍋拿出來后，溶液一回到常溫硫氰酸胍立馬會析出。 2）如果我加入蛋白酶K和精子樣品，56℃下消化2h后，將樣品取出做進一步抽提時，還是會析出沉淀，這是什么回事？消化之后我加入0.6倍體積異丙醇之后并沒有見到絮狀DNA。 所以我的疑問是： 異硫氰酸胍在溶解配制裂解液（常用于提取RNA）時有什么要求嗎？PH，溶劑類型？ 如果異硫氰酸胍析出是正�，F(xiàn)象，那近一步實驗應(yīng)該怎么改進，有沒有什么好的建議？ 另：異硫氰酸胍為前2天剛從solarbio（索來寶）公司買的，質(zhì)量上應(yīng)該沒有問題。 附近為參考文獻 |
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2013-07-24 22:24:25, 184.86 K
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4樓2020-10-14 16:47:12
2樓2013-07-25 11:11:06
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