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學(xué)術(shù)問題銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
新手 熒光定量模板 問題？ 切切�。�
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首先：我的對照組：把第0,1 2 ，……40天RNA進(jìn)行等量混合后得到RNA混合樣品 CK:濃度是284.6。。。（每天取400ng等量混合） 其次：實驗組：也是第0,1,2，……40天RNA樣品混合后得到RNA混合樣品CU：濃度是322.4。。。（也是每天取400ng等量混合） 但是由于反轉(zhuǎn)錄效率等一系列原因 造成最后 實驗組和對照組反轉(zhuǎn)錄后cDNA濃度不一樣。 問題就來了：那么我上熒光的時候需不需要把實驗組和對照組的模板 即：加的CDNA量 必須一致嗎？？比如 實驗組模板cDNA加100ng，對照組也加模板cDNA 100ng。（如果不一樣的話，那么本來實驗組a基因表達(dá)微弱，但是加的模板比較多，所以檢測出來就比對照組表達(dá)高） 不知道我的想法對不對呢？？？急急急 |
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2樓2013-07-26 01:16:20
學(xué)術(shù)問題
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3樓2013-07-26 08:29:10
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kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2013-07-26 11:22:54
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kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2013-07-26 11:22:54
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不是這個意思。做定量要讓模板的量是一致的，如果模板量相差很多會直接影響到擴(kuò)增效率。標(biāo)準(zhǔn)曲線線性好擴(kuò)增效率接近1也是在一定范圍內(nèi)的。但是從RNA反轉(zhuǎn)錄來的cDNA不能直接定量，需要消化掉RNA并經(jīng)過純化才能定量，沒有人這樣去做的。cDNA樣品不能直接定量原因我前面已經(jīng)解釋了。所以要用同樣量的RNA做反轉(zhuǎn)錄，為了保證效率一致，需要比較的樣品最好同時做反轉(zhuǎn)錄。用內(nèi)參去消除樣品之間的微量差別也就是1與0.9，0.8的差別，不是1與10的差別。 |
4樓2013-07-26 09:42:37
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5樓2013-07-26 11:07:41
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6樓2013-07-26 15:12:20
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7樓2013-07-26 19:48:22
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