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Q柱純化一個(gè)蛋白出現(xiàn)的問題，氯化鈉洗脫濃度一變就出現(xiàn)降解
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手上在做一個(gè)蛋白，極易降解，現(xiàn)在已經(jīng)摸索出上樣后一直用0.1M的氯化鈉沖洗近30個(gè)柱體積才勉勉強(qiáng)強(qiáng)把蛋白從柱子上沖下來，其中前幾個(gè)柱體積沖下來的是有降解條帶的，后面沖下來的沒有降解。 后來也實(shí)驗(yàn)了，用0.1M氯化鈉沖洗幾個(gè)柱體積后，理論上應(yīng)該已經(jīng)把降解條帶沖干凈了，再換到0.5M氯化鈉來沖洗，但是結(jié)果下來還是含有很多的降解條帶，這是怎么回事呢？ Q柱在上樣過程中頂部的膠回變灰，是不是損壞膠了？我的工作液中一直有尿素，Q能長時(shí)間有尿素嗎？ 還是Q柱被金屬污染了，有看到有本書里說離子交換柱被金屬污染了就會頂部變藍(lán)色或者灰色，可以用幾倍體積的飽和EDTA+10mM的鹽酸ph2來處理柱子，Q能奈受這么低的ph嗎？記得實(shí)驗(yàn)室?guī)熜终fQ不能用酸處理的。 Q柱大家是怎么再生的，有辦法除上面結(jié)合的色素嗎？ |
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