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maple032023銅蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
P450BM3表達(dá)
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從巨大芽孢桿菌中克隆P450BM3基因，表達(dá)質(zhì)粒pET-22b，表達(dá)菌株E.coli BL21，重組菌構(gòu)建成功，測(cè)序正確。表達(dá)體系為T(mén)B培養(yǎng)基加入各種金屬離子，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)24h，超聲破碎得粗酶液SDS檢測(cè)沒(méi)有目的條帶，用NADPH方法檢測(cè)也顯示沒(méi)有活性。懷疑可能是沒(méi)有表達(dá)出來(lái)，原因不確定。是表達(dá)質(zhì)粒有問(wèn)題？還是表達(dá)菌株？表達(dá)過(guò)程中我沒(méi)有加氨基乙酰丙酸，是不是也有影響？ 第一次做P450，請(qǐng)大家多多幫忙。如果有朋友做過(guò)P450BM3表達(dá)并有成熟的protocol可以跟我分享一下的話我將不勝感激。 |
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yinl03
銀蟲(chóng) (小有名氣)
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2樓2013-08-01 11:29:52
whdxhxy
木蟲(chóng) (小有名氣)
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3樓2013-08-02 10:19:24
alice
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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4樓2013-08-02 14:36:44
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