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maple032023銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
P450BM3表達(dá)
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從巨大芽孢桿菌中克隆P450BM3基因，表達(dá)質(zhì)粒pET-22b，表達(dá)菌株E.coli BL21，重組菌構(gòu)建成功，測序正確。表達(dá)體系為TB培養(yǎng)基加入各種金屬離子，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)24h，超聲破碎得粗酶液SDS檢測沒有目的條帶，用NADPH方法檢測也顯示沒有活性。懷疑可能是沒有表達(dá)出來，原因不確定。是表達(dá)質(zhì)粒有問題？還是表達(dá)菌株？表達(dá)過程中我沒有加氨基乙酰丙酸，是不是也有影響？ 第一次做P450，請大家多多幫忙。如果有朋友做過P450BM3表達(dá)并有成熟的protocol可以跟我分享一下的話我將不勝感激。 |
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whdxhxy
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4樓2013-08-02 14:36:44
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