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請幫幫我!從低熔點膠中回收BAC大片段≥20kb,但是重復三遍一點收獲都沒有%>_<% 已有2人參與
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我是個小白,請師哥師姐幫個忙啊……亞歷山大現(xiàn)在在做一個BAC的亞克隆,提得質(zhì)粒之后BamHI酶切,跑瓊脂糖膠。 因為在上海的連續(xù)高溫中,脆弱的低熔點膠不能完全固化,比果凍還脆弱,在師姐的建議下,我用普通膠去跑,之后再目的條帶的下游挖去普通膠,在槽中灌入低熔點膠,之后繼續(xù)電泳讓條帶進入低熔點膠里面。 然后切膠回收。 此時條帶清晰明顯,回收到的低熔點膠也可以在紫外燈下發(fā)出EB的熒光。 回收用的是瓊脂糖酶,完全按照說明書上的protocol操作,先融化,后加酶消化瓊脂糖,用異丙醇沉淀回收。 最后在離心管中見到了少量透明玻璃樣的沉淀 參照師姐的建議,我只用12μl的TE溶解沉淀,取出其中的2μl跑膠驗證。 可是最后卻什么都沒有得到! 沒有條帶,甚至一點痕跡都沒有!我已經(jīng)重復了3遍了,連續(xù)將近一個月在大提BAC。每次都是好幾個瓶子搖出來的,提到的BAC卻不夠我折騰一次的。到這一步走不下去了……請幫幫我! 跪謝跪謝! |
木蟲 (正式寫手)

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