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[交流]
請幫幫我！從低熔點膠中回收BAC大片段≥20kb，但是重復(fù)三遍一點收獲都沒有%>_<% 已有2人參與
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我是個小白，請師哥師姐幫個忙啊……亞歷山大現(xiàn)在在做一個BAC的亞克隆，提得質(zhì)粒之后BamHI酶切，跑瓊脂糖膠。 因為在上海的連續(xù)高溫中，脆弱的低熔點膠不能完全固化，比果凍還脆弱，在師姐的建議下，我用普通膠去跑，之后再目的條帶的下游挖去普通膠，在槽中灌入低熔點膠，之后繼續(xù)電泳讓條帶進入低熔點膠里面。 然后切膠回收。 此時條帶清晰明顯，回收到的低熔點膠也可以在紫外燈下發(fā)出EB的熒光。 回收用的是瓊脂糖酶，完全按照說明書上的protocol操作，先融化，后加酶消化瓊脂糖，用異丙醇沉淀回收。 最后在離心管中見到了少量透明玻璃樣的沉淀 參照師姐的建議，我只用12μl的TE溶解沉淀，取出其中的2μl跑膠驗證。 可是最后卻什么都沒有得到！ 沒有條帶，甚至一點痕跡都沒有！我已經(jīng)重復(fù)了3遍了，連續(xù)將近一個月在大提BAC。每次都是好幾個瓶子搖出來的，提到的BAC卻不夠我折騰一次的。到這一步走不下去了……請幫幫我！ 跪謝跪謝�。� |
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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4樓2013-08-05 09:49:46
Sthunder
木蟲 (正式寫手)
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2樓2013-08-03 23:30:06
3樓2013-08-04 13:36:46
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