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ni柱純化問(wèn)題 已有1人參與
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大家好，我最近用金斯瑞的Ni柱純化我的蛋白（帶His6），上樣過(guò)程會(huì)穿過(guò)挺多，吸附也較弱（說(shuō)明書(shū)上的緩沖液 Lysis Equilibration Buffer (LE buffer): 50 mM NaH 2 PO4, 300 mM NaCl, pH 8.0 Wash Buffer: 50 mM NaH 2 PO4, 300 mM NaCl, 10 mM imidazole, pH 8.0 Elution buffer: 50 mM NaH 2 PO4, 300 mM NaCl, 250 mM imidazole, pH 8.0 就是用10mM咪唑洗雜，我用10mM咪唑基本洗脫了），想問(wèn)大家，Ni柱有哪些上樣方式，可以把柱材和我樣品混勻過(guò)夜，第二天裝柱嗎？大家平時(shí)還用什么緩沖液效果好，謝謝大家 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-08-14 13:15:55
雞鳴不已: 金幣+15, ★★★很有幫助, 謝謝 2013-08-14 14:50:41
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| 我也用過(guò)金斯瑞的Ni-IDA，說(shuō)明書(shū)上說(shuō)可以掛20mg，我用過(guò)1ml的Ni純化 到了十幾毫克的蛋白。你可以把樣品和Ni過(guò)夜結(jié)合，最好在4℃，而且要振搖使Ni懸浮。還有，如果你是過(guò)離子交換的，高鹽不利于Ni與蛋白的結(jié)合。過(guò)夜結(jié)合，雜蛋白可能較多，你漂洗的時(shí)候可以較大咪唑濃度。不如說(shuō)20 30 40 |
11樓2013-08-14 12:39:07
zhang1zheng2
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2樓2013-08-06 11:19:33
3樓2013-08-06 15:23:34
zhang1zheng2
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4樓2013-08-06 15:30:02
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