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[求助]
ni柱純化問題 已有1人參與
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大家好，我最近用金斯瑞的Ni柱純化我的蛋白（帶His6），上樣過程會(huì)穿過挺多，吸附也較弱（說明書上的緩沖液 Lysis Equilibration Buffer (LE buffer): 50 mM NaH 2 PO4, 300 mM NaCl, pH 8.0 Wash Buffer: 50 mM NaH 2 PO4, 300 mM NaCl, 10 mM imidazole, pH 8.0 Elution buffer: 50 mM NaH 2 PO4, 300 mM NaCl, 250 mM imidazole, pH 8.0 就是用10mM咪唑洗雜，我用10mM咪唑基本洗脫了），想問大家，Ni柱有哪些上樣方式，可以把柱材和我樣品混勻過夜，第二天裝柱嗎？大家平時(shí)還用什么緩沖液效果好，謝謝大家 |
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銅蟲 (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
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1．1M,Tris-Hcl ph=9.0: 60.5g Tris 溶解到450ml水中，調(diào)節(jié)PH，然后定容至500ml； 2. 結(jié)合緩沖液（PH=7.0的磷酸鈉）：3.8g磷酸三鈉溶解到450ml水調(diào)節(jié)ph到7.0； 3．0.1M甘氨酸-鹽酸緩沖液：1.5g甘氨酸溶解到150ml水調(diào)節(jié)ph到3.0定容至200ml. 計(jì)算方法以Tris-Hcl為例： Tris分子量為121 要求1M： 根據(jù)公式：c=n/v，n=m/M，m=nM=1*121=121g,v=1000，然后再縮小相同倍數(shù)。  |
18樓2013-08-14 15:34:09
zhang1zheng2
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2樓2013-08-06 11:19:33
3樓2013-08-06 15:23:34
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4樓2013-08-06 15:30:02
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