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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 硫酸銨沉淀
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[求助]
硫酸銨沉淀
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| 今天進行硫酸銨沉淀蛋白的實驗。但是在實驗之前我忽視了溶液的ph 問題。再加入硫酸銨進行沉淀時，才注意到自己的容易pH 為12.硫酸銨加入后會釋放氨氣。。我想問這會對我的硫酸銨沉淀蛋白質(zhì)有影響嗎？ |
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5樓2013-08-10 11:20:34
【答案】應助回帖
★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
silicare: 金幣+2, 辛苦了 2013-08-07 18:14:32
感謝參與，應助指數(shù) +1
silicare: 金幣+2, 辛苦了 2013-08-07 18:14:32
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1.鹽析一般是指溶液中加入無機鹽類而使某種物質(zhì)溶解度降低而析出的過程。如：加濃（NH4）2SO4使蛋白質(zhì)凝聚的過程；在乙酸的酯化反應中加入飽和碳酸鈉溶液，降低乙酸乙酯溶解度，使其分層現(xiàn)象更明顯的過程。 2.向某些蛋白質(zhì)溶液中加入某些無機鹽溶液后，可以降低蛋白質(zhì)的溶解度，使蛋白質(zhì)凝聚而從溶液中析出,這種作用叫作鹽析，是物理變化，可復原。向某些蛋白質(zhì)溶液中加入某些重金屬鹽，可以使蛋白質(zhì)性質(zhì)發(fā)生改變而凝聚，進而從溶液中析出，這種作用叫作變性，性質(zhì)改變，是化學反應，無法復原。 3.把動物脂肪或植物油與氫氧化鈉按一定比例放在皂化鍋內(nèi)攪拌加熱，反應后形成的高級脂肪酸鈉、甘油、水形成混合物。往鍋內(nèi)加入食鹽顆粒，攪拌、靜置，使高級脂肪酸鈉與甘油、水分離，浮在液面。（該反應用以制肥皂） 簡單的說就是利用高濃度中性鹽使蛋白質(zhì)發(fā)生沉淀；蛋白質(zhì)的溶解度（S）不同，用于沉淀的鹽濃度不同。 蛋白鹽析的影響因素 1． 蛋白質(zhì)的濃度： 中性鹽沉淀蛋白質(zhì)時，溶液中蛋白質(zhì)的實際濃度對分離的效果有較大的影響。通常高濃度的蛋白質(zhì)用稍低的硫酸銨飽和度即可將其沉淀下來，但若蛋白質(zhì)濃度過高，則易產(chǎn)生各種蛋白質(zhì)的共沉淀作用，除雜蛋白的效果會明顯下降。對低濃度的蛋白質(zhì)，要使用更大的硫酸銨飽和度，但共沉淀作用小，分離純化效果較好，但回收率會降低。通常認為比較適中的蛋白質(zhì)濃度是2.5％～3.0％，相當于25 mg/mL～30mg/mL。 2． 離子強度: 各種蛋白質(zhì)的沉淀要求不同的離子強度。 3． 鹽的性質(zhì)： 最有效的鹽是多電荷陰離子。 4． PH值： 一般說來，蛋白質(zhì)所帶凈電荷越多，它的溶解度就越大。改變pH值可改變蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)，因而就改變了蛋白質(zhì)的溶解度。遠離等電點處溶解度大，在等電點處溶解度小，因此用中性鹽沉淀蛋白質(zhì)時，pH值常選在該蛋白質(zhì)的等電點附近。 5． 溫度： 除對溫度敏感的蛋白質(zhì)在低溫（4度）操作外，一般可在室溫中進行。一般溫度低蛋白質(zhì)溶介度降低。但有的蛋白質(zhì)（如血紅蛋白、肌紅蛋白、清蛋白）在較高的溫度（25度）比0度時溶解度低，更容易鹽析。 6． 蛋白質(zhì)沉淀后宜在4℃放3小時以上或過夜，以形成較大沉淀而易于分離。鹽析時，分子量較小的蛋白質(zhì)逐步沉淀下來可能就值得懷疑。具體的蛋白需要具體的摸索，當然，對肽來說，結(jié)論也是一樣的。 鹽析結(jié)晶原理 鹽析結(jié)晶是指在鹽溶液體系中，加入某種電解質(zhì)鹽析劑, 這種加入的鹽析劑，其離子的水合作用比原溶液中其它鹽較強， 它使溶液中自由水分子數(shù)減小, 從而提高溶液中欲結(jié)晶物質(zhì)在溶液中的有效濃度，使欲結(jié)晶物質(zhì)在溶液中結(jié)晶析出， 這就是鹽析結(jié)晶。 研究表明，水對陰、陽離子都有較強溶劑化作用，但對陽離子比陰離子有更大的溶劑化作用。因此鹽析劑作用主要表現(xiàn)在鹽析劑陽離子溶劑化作用上。鹽析劑與水結(jié)合愈強烈，鹽析效應愈強。由于水合數(shù)與離子的大小有關，即離子愈小，水合數(shù)就愈大，鹽析效應也愈強。鹽析劑所含陽離子半徑愈小，電荷愈多，則對被鹽析離子的水化層影響愈大，使被鹽析離子脫水愈易，其鹽析效應愈強。所以化工生產(chǎn)中常用的鹽析劑多是離子勢較大的陽離子Li+、Al3+、Fe3+、Mg2+、Sn2+等形成的鹽。我們選擇了這些陽離子所形成的氯化物和硝酸鹽, 并通過探索性實驗， 確定選用一種較合適的鹽析劑。 |
2樓2013-08-07 15:22:25
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