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pushizi木蟲 (小有名氣)
pushizi
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[求助]
示蹤色素覆蓋在蛋白條帶上-western blot結果很難看-求解決
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最近在進行一個約為14 kD大小蛋白的western blot實驗，很郁悶的是：電泳出來后，我的蛋白條帶就在loading buffer的指示劑（考馬斯亮藍（G250））的藍色部分區(qū)域，將其轉到硝酸纖維素膜后，藍色的染料也能轉到膜上，顯色完條帶就跟藍色的交雜在一起，非常難看。思考以下解決方案，請大家多提建議，哪條可行： （1）換用膠的濃度：現(xiàn)在用的是15%的膠。是否應該換用20%的膠濃度？看一些帖子里好像指示劑的快慢在不同的膠濃度中不同。20%的膠中指示劑的大小在哪里？有沒有蟲友做過��？另外，14kD的蛋白是不是用20%的膠濃度有點夸張啊？ （2）將示蹤劑換為溴酚藍？看一些帖子中有人說溴酚藍能跑在7 kD的蛋白以下，又有人說在17kD左右，有否確定的說法啊？請注下膠濃度~~ （3）能否不加指示劑�。績H用甘油沉淀蛋白，然后用預染marker進行指示？這個過程有人做過么？會有問題么？另外，甘油的終濃度采用多少比較好��？ 最后，再請教大家一個問題，在做western blot的過程中，條帶總是溢出，我不確定每個樣品（全細胞裂解液）中我的目的蛋白有多少，那么我除了反復試驗，減少上樣量之外，有沒有其他什么快速簡便的方法來解決？ 感謝從頭看到尾的朋友們！更加感謝能夠為我解答的各位好心人！在此先謝過��！ |
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