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[求助]
通過(guò)紫外吸收光譜確定金屬是否與蛋白結(jié)合----很多疑問(wèn)，跪求大神解答！
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文獻(xiàn)上類(lèi)似的實(shí)驗(yàn)做出來(lái)的圖上吸收峰在265nm，說(shuō)是一價(jià)銅的硫醇鹽特有的吸收峰，我的金屬和他不同，做出來(lái)有好多峰，同時(shí)做了空白buffer以及僅是蛋白、僅是金屬的對(duì)照，所有的樣品的趨勢(shì)幾乎完全相同，也就是說(shuō)沒(méi)發(fā)現(xiàn)有十分明顯的特異的峰�，F(xiàn)在的問(wèn)題是： 1.文獻(xiàn)用的是hepes buffer ,我用的是tris-hcl,因?yàn)槲矣X(jué)得hepes里有很多金屬，會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)。那么我到底該用哪個(gè)？tris-hcl做紫外吸收光譜的溶劑可行嗎？ 2.我將蛋白溶液和金屬溶液加進(jìn)孔板里后，在讀數(shù)之前是否需要孵育或者振蕩他們才能很好的結(jié)合？ 3.從我目前的實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，似乎253nm處有一個(gè)峰，請(qǐng)問(wèn)二價(jià)銅若是和半胱氨酸結(jié)合，產(chǎn)生的吸收峰是多大？253有可能是什么特定結(jié)構(gòu)的峰？ 第一次做，完全沒(méi)有概念，做出來(lái)的數(shù)據(jù)又摸不著頭腦，蛋白是合成的，很貴很少，又不敢輕舉妄動(dòng)。。哪位大神熟悉這塊兒的幫忙解答下吧！謝謝了！ |
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2樓2013-08-15 13:44:02
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