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通過紫外吸收光譜確定金屬是否與蛋白結合----很多疑問，跪求大神解答！
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文獻上類似的實驗做出來的圖上吸收峰在265nm，說是一價銅的硫醇鹽特有的吸收峰，我的金屬和他不同，做出來有好多峰，同時做了空白buffer以及僅是蛋白、僅是金屬的對照，所有的樣品的趨勢幾乎完全相同，也就是說沒發(fā)現(xiàn)有十分明顯的特異的峰�，F(xiàn)在的問題是： 1.文獻用的是hepes buffer ,我用的是tris-hcl,因為我覺得hepes里有很多金屬，會干擾實驗。那么我到底該用哪個？tris-hcl做紫外吸收光譜的溶劑可行嗎？ 2.我將蛋白溶液和金屬溶液加進孔板里后，在讀數(shù)之前是否需要孵育或者振蕩他們才能很好的結合？ 3.從我目前的實驗結果來看，似乎253nm處有一個峰，請問二價銅若是和半胱氨酸結合，產(chǎn)生的吸收峰是多大？253有可能是什么特定結構的峰？ 第一次做，完全沒有概念，做出來的數(shù)據(jù)又摸不著頭腦，蛋白是合成的，很貴很少，又不敢輕舉妄動。。哪位大神熟悉這塊兒的幫忙解答下吧！謝謝了！ |
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2樓2013-08-15 13:44:02
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