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123彭好好

新蟲(chóng) (初入文壇)

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[求助] 蛋白質(zhì)SDS-丙烯酰胺凝膠電泳連mark都沒(méi)有跑動(dòng)

我利用不同的溶液提取了蛋清中的幾種不同溶性的蛋白質(zhì)，進(jìn)行了兩次電泳，全都失敗了。所有的點(diǎn)樣及mark都沒(méi)有動(dòng)，在63V電壓下跑了2個(gè)多小時(shí)。樣品沒(méi)有經(jīng)過(guò)透析處理，就直接和樣品緩沖液混合煮沸了5分鐘，就開(kāi)始點(diǎn)樣了。不知道具體的問(wèn)題出在哪里，讓我的實(shí)驗(yàn)沒(méi)有辦法正常進(jìn)行，希望能有人幫我解答��！
以下是我所用的膠的配方：
10%分離膠：
水                                  1.9ml
1.5mol/l Tris-Hcl(PH=8.8) 1ml
30%丙烯酰胺                   1.7ml
10%SDS                         50μl
10%AP                            50μl
TEMED                            2μL

濃縮膠：
水                                  1.4ml
1.5mol/l Tris-Hcl(PH=6.8) 0.25ml
30%丙烯酰胺                   0.33ml
10%SDS                         20μl
10%AP                            20μl
TEMED                            2μL

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1樓 2013-08-16 08:59:16

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123彭好好

新蟲(chóng) (初入文壇)

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引用回帖:

2樓: Originally posted by windygo at 2013-08-16 09:48:13
樓主別著急，先看是否你的電泳槽正負(fù)極接反了；
如果都好著的話，那就看下自己的其他東西有沒(méi)有配錯(cuò)，比如說(shuō)電極緩沖液等。

電極是沒(méi)有接反的，我用的電極緩沖配方是：
Tris             3.02g
甘氨酸       14.4g
SDS             1g
水                1L
我覺(jué)得問(wèn)題應(yīng)該不出在這里吧？

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3樓2013-08-16 12:03:56

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windygo

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★
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123彭好好: 金幣+1, ★有幫助 2013-08-20 17:58:59

樓主別著急，先看是否你的電泳槽正負(fù)極接反了；
如果都好著的話，那就看下自己的其他東西有沒(méi)有配錯(cuò)，比如說(shuō)電極緩沖液等。

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我已經(jīng)開(kāi)始懷念那些人，那些事了~

2樓2013-08-16 09:48:13

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sunnymen

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hsd3521: 應(yīng)助指數(shù)-1, 非有效應(yīng)助 2013-08-17 10:20:50

63V電壓，怎么選擇這個(gè)電壓，奇怪

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4樓2013-08-16 16:31:11

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sunnymen

銀蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

hsd3521: 屏蔽內(nèi)容, 不支持QQ群宣傳 2013-08-17 10:21:08

本帖內(nèi)容被屏蔽

5樓2013-08-16 16:33:22

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