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xiao7867金蟲 (初入文壇)
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[求助]
重疊pcr
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本人做重疊pcr，引物結(jié)合部位是30bp，完全互補，用pfu酶第一輪pcr結(jié)果大概是1000bp，條帶清晰正確，切膠回收，測過濃度之后，將其稀釋到10ng/ul做模板，用50ul體系各加1ul做模板，溫度梯度也做了，pcr結(jié)果老是只有一條鏈的長度，要不就是彌散的。 請我一下：重疊pcr是和平常的pcr一樣做嗎？還是想有人說的先做3-5各循環(huán)，然后再加入兩端引物呢？？？ 退火的溫度與互補的引物Tm值之間有什么關(guān)系嗎？ 模板量大概是多少呢？ 做了一個暑假了，就卡在這個問題上了，快郁悶死了！ 請做過的朋友不吝賜教，先謝謝哈�。�！ |
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3樓2013-08-18 09:53:31
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xiao7867: 金幣+2 2013-08-18 10:35:30
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2樓2013-08-18 09:11:55
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