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[求助]
化合物分離、純化
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【請教】：用微生物發(fā)酵獲得了其次級代謝產(chǎn)物，現(xiàn)在要將其中的化合物都分離純化出來并鑒定他們的結(jié)構(gòu)，有做這一塊的嗎？分離的過程都有哪些（過哪些柱子以及順序）的。 |
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2樓2013-08-22 10:02:02
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
飛飛-笑笑: 金幣+2, ★★★很有幫助 2013-08-23 17:32:29
飛飛-笑笑: 金幣+2, ★★★很有幫助 2013-08-23 17:32:29
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《狗尾草平臍蠕孢NY1 菌株的次級代謝產(chǎn)物分析》 文獻(xiàn) 每瓶大米發(fā)酵物加 200mL 乙酸乙酯浸泡 1d ， 取 上 層 乙 酸 乙 酯 相 ， 用 旋 轉(zhuǎn) 蒸 發(fā) 儀 （N-1100D，上海愛朗儀器有限公司）40℃下蒸 干得到褐色油狀粗提物。用上述方法對大米發(fā) 酵物重復(fù)提取 3 次，合并粗提物。加 1–1.5 倍 100–200 目硅膠于粗提物中，攪拌均勻后倒入 減壓柱中，用石油醚:乙酸乙酯（90:10，85:15， 80:20，75:25，70:30，65:35，60:40）和純甲醇 梯度洗脫，得到不同極性的組分。用薄層層析 法（TLC）對每個組分進(jìn)行分析，根據(jù)化合物 在薄層層析板（GF 254，青島海洋化工有限公司） 上的極性大小和成點性來選擇合適的洗脫劑對 欲分離化合物反復(fù)純化，純化方法主要為硅膠 柱層析（200–300 目，青島海洋化工有限公司） 和凝膠柱層析（Sephadex LH-20、Sephadex LH-60，瑞典 Amersham Biosciences 公司）�；� 合物的鑒定主要依據(jù)核磁共振（AVANCE Ⅲ 600Hz，德國 Bruker 公司，氘代試劑為 CDCl 3、 acetone-d 6）和質(zhì)譜（Apex-Ultra 7.0 T，德國 Bruker 公司）數(shù)據(jù)。 每種微生物的代謝產(chǎn)物的分離過程是不同的，你最好還是貼出微生物的種類。去谷歌學(xué)術(shù)上搜索中英文就出來了 |
3樓2013-08-22 10:03:44
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謝謝你的介紹哈！ 我這菌株是收集自福建廈門一片紅樹林里的真菌，命名為BY1，前期的發(fā)酵使其得次級代謝產(chǎn)物已經(jīng)做過了。之后是用的乙酸乙酯：甲醇：乙酸=80:15:5的比例進(jìn)行的浸提，浸提后旋蒸稱重。然后過的中壓型液相（填料是C18），用甲醇：蒸餾水=100:0、70:30、50:50、30:70以及0:100的幾個梯度洗脫。洗脫后的的每一個梯度再用的葡聚糖凝膠柱（流動相甲醇或丙酮）和硅膠柱進(jìn)行的分離。但是正常在過硅膠柱時薄層板上的點板只顯示一個或兩個的時候才比較好去用硅膠柱去分離的，而我苦惱的是過完凝膠柱后用薄層板分析時，往往是3-4個化合物。所以我想找另一種方法能再細(xì)分一下的。所以才求請教的~ 看了你的回復(fù)后，感覺其實純化的步驟是同步的只是有些細(xì)節(jié)不太相同。 很感激啊  !!!!!!!!!!!! |
4樓2013-08-23 17:26:51
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