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[求助]
化合物分離、純化
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【請(qǐng)教】：用微生物發(fā)酵獲得了其次級(jí)代謝產(chǎn)物，現(xiàn)在要將其中的化合物都分離純化出來并鑒定他們的結(jié)構(gòu)，有做這一塊的嗎？分離的過程都有哪些（過哪些柱子以及順序）的。 |
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2樓2013-08-22 10:02:02
【答案】應(yīng)助回帖
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飛飛-笑笑: 金幣+2, ★★★很有幫助 2013-08-23 17:32:29
飛飛-笑笑: 金幣+2, ★★★很有幫助 2013-08-23 17:32:29
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《狗尾草平臍蠕孢NY1 菌株的次級(jí)代謝產(chǎn)物分析》 文獻(xiàn) 每瓶大米發(fā)酵物加 200mL 乙酸乙酯浸泡 1d ， 取 上 層 乙 酸 乙 酯 相 ， 用 旋 轉(zhuǎn) 蒸 發(fā) 儀 （N-1100D，上海愛朗儀器有限公司）40℃下蒸 干得到褐色油狀粗提物。用上述方法對(duì)大米發(fā) 酵物重復(fù)提取 3 次，合并粗提物。加 1–1.5 倍 100–200 目硅膠于粗提物中，攪拌均勻后倒入 減壓柱中，用石油醚:乙酸乙酯（90:10，85:15， 80:20，75:25，70:30，65:35，60:40）和純甲醇 梯度洗脫，得到不同極性的組分。用薄層層析 法（TLC）對(duì)每個(gè)組分進(jìn)行分析，根據(jù)化合物 在薄層層析板（GF 254，青島海洋化工有限公司） 上的極性大小和成點(diǎn)性來選擇合適的洗脫劑對(duì) 欲分離化合物反復(fù)純化，純化方法主要為硅膠 柱層析（200–300 目，青島海洋化工有限公司） 和凝膠柱層析（Sephadex LH-20、Sephadex LH-60，瑞典 Amersham Biosciences 公司）�；� 合物的鑒定主要依據(jù)核磁共振（AVANCE Ⅲ 600Hz，德國 Bruker 公司，氘代試劑為 CDCl 3、 acetone-d 6）和質(zhì)譜（Apex-Ultra 7.0 T，德國 Bruker 公司）數(shù)據(jù)。 每種微生物的代謝產(chǎn)物的分離過程是不同的，你最好還是貼出微生物的種類。去谷歌學(xué)術(shù)上搜索中英文就出來了 |
3樓2013-08-22 10:03:44
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謝謝你的介紹哈！ 我這菌株是收集自福建廈門一片紅樹林里的真菌，命名為BY1，前期的發(fā)酵使其得次級(jí)代謝產(chǎn)物已經(jīng)做過了。之后是用的乙酸乙酯：甲醇：乙酸=80:15:5的比例進(jìn)行的浸提，浸提后旋蒸稱重。然后過的中壓型液相（填料是C18），用甲醇：蒸餾水=100:0、70:30、50:50、30:70以及0:100的幾個(gè)梯度洗脫。洗脫后的的每一個(gè)梯度再用的葡聚糖凝膠柱（流動(dòng)相甲醇或丙酮）和硅膠柱進(jìn)行的分離。但是正常在過硅膠柱時(shí)薄層板上的點(diǎn)板只顯示一個(gè)或兩個(gè)的時(shí)候才比較好去用硅膠柱去分離的，而我苦惱的是過完凝膠柱后用薄層板分析時(shí)，往往是3-4個(gè)化合物。所以我想找另一種方法能再細(xì)分一下的。所以才求請(qǐng)教的~ 看了你的回復(fù)后，感覺其實(shí)純化的步驟是同步的只是有些細(xì)節(jié)不太相同。 很感激啊  !!!!!!!!!!!! |
4樓2013-08-23 17:26:51
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