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hellohuo金蟲 (小有名氣)
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[求助]
提RNA的技術問題以及改進的建議
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1.我用的是天根的提取液； 2.操作都是在冰上進行，但是提出來的結果還是不理想； 3.在氯仿抽提的時候，也盡量沒有抽到中間的沉淀及下面的液體。 但是這樣的結果很不理想，我要做QPCR，所以要對RNA的質量要求比較高，故請教各位大蝦，希望大家能給一些改進的意見和建議，越多越好，謝謝~~~ 2013.8.6RNA提取.JPG [ Last edited by 1949stone on 2013-9-9 at 16:16 ] |
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有用過其他方法嗎？我用CTAB法提過葉子的，還挺好的！ CTAB-LiCl沉淀法提取RNA 1. 將2×CTAB 提取液于65℃水浴鍋中預熱。取0.1-0.2g樣品于液氮中研磨成粉末 2. 轉入2ml離心管中，加700ul提取液，同時加20ulβ-巰基乙醇 3. 劇烈振蕩混勻，65℃水浴10 min，期間振蕩數(shù)次 4. 冷卻到室溫，加等體積氯仿:異戊醇(24:1)，充分振蕩，冰浴10min 5. 4℃，12000g，離心10 min 6. 取上清至新2ml離心管，重復上述步驟，再抽提1次 7. 取上清于1.5ml離心管中，加入1/4體積的10 mol/L LiCl溶液 8. 4℃條件下過夜，或-20℃下放置6 h 以上，使RNA 沉淀 9. 4℃，12000g，離心20 min，棄上清，獲粗提的總RNA 沉淀 10. 用500ul ddH2O溶解，加等體積氯仿/異戊醇（24:1）再抽提1次 11. 4℃，12000g，離心10min 12. 取上清，加1/10體積3mol/LNaAc（PH5.2），混勻后，加等體積預冷的異丙醇，-20℃沉淀2-3h 13. 4℃，12000g，離心10min，棄上清，用75%乙醇洗沉淀2次 14. 短暫離心吸出多余液體，室溫干燥，ddH2O溶解，-80℃保存 |
12樓2013-09-05 14:06:00
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10樓2013-09-05 09:14:30
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