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重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后綠色熒光表達(dá)的很奇怪，附圖，求大神解釋~~感激不盡
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重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后綠色熒光表達(dá)的很奇怪， 和文獻(xiàn)與別人做的差別很大， 我的熒光圖都看不懂細(xì)胞形態(tài)，就是稀稀拉拉的云霧狀，不知道是什么原因。 附圖如下，求大神解釋~~感激不盡 我用的載體是pEGFP-C2  20倍-8y-bl-木蟲求助.jpg 40倍-10y-木蟲求助.jpg 20倍-9p-木蟲求助-明場.jpg 20倍-9y-木蟲求助-明場對應(yīng).jpg 空載對照.JPG [ Last edited by sherrysure on 2013-9-5 at 14:52 ] |
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 細(xì)胞生物學(xué)實驗經(jīng)驗 |
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sherrysure: 金幣+5, 謝謝！ 2013-09-06 16:28:10
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| 1.文章里的圖一般都是拍了幾張甚至幾十張里挑最佳視野的結(jié)果。而且一般都修過。你適當(dāng)減低曝光時間，會更清晰些。2.轉(zhuǎn)染過程對細(xì)胞膜是有損傷的，有時損傷很大。這導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)改變很正常。特別是瞬時轉(zhuǎn)染24h后就觀察的有時細(xì)胞還沒恢復(fù)。細(xì)胞傳個代要貼壁也得幾個小時吧。所以轉(zhuǎn)染遇到這情況很正常。如果表達(dá)幾天內(nèi)穩(wěn)定，可以適當(dāng)讓細(xì)胞恢復(fù)一下（推測）3.膜蛋白的過表達(dá)可能影響細(xì)胞形態(tài)。畢竟膜表面的粘附可能會受到影響。4.空載體對照和你的基因的區(qū)別不明顯。分不清細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜表達(dá)。你把曝光時間調(diào)小，讓光弱些，換40倍鏡試試.調(diào)焦再細(xì)心些。照片熒光不要太亮了，導(dǎo)致周圍都有些綠色了（空載體明顯）。5.建議使用染料染細(xì)胞膜。這樣能使結(jié)果更清晰準(zhǔn)確。6.有條件的可以試試激光共聚焦顯微鏡，會清晰很多（調(diào)焦要耐心。）總之，轉(zhuǎn)進(jìn)去了，表達(dá)了，現(xiàn)在只是拍照和處理圖片的問題，別太擔(dān)心。很可能轉(zhuǎn)入這個基因就是這樣的。 |
10樓2013-09-05 15:25:08
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