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zhougzhou至尊木蟲 (正式寫手)
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[求助]
GFP重組表達(dá)質(zhì)粒電泳問題
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我構(gòu)建的GFP與一個基因的重組表達(dá)載體，正常下應(yīng)該是5kbp左右，但每次提質(zhì)粒后電泳都顯示在2500bp左右有條強帶，而5kbp左右也有條帶但較弱。請問這是正常的嗎？急求答案。 PS：小弟接著下去要做轉(zhuǎn)染，以前做成功過（能發(fā)綠色熒光），但最近怎么不發(fā)光了，所以想問是否構(gòu)建質(zhì)粒出了問題。 |
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nmhsd
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zhougzhou: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-11-30 03:39:49
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| 沒做酶切的質(zhì)粒電泳是不能判斷質(zhì)粒大小的，無論是跑快了還是跑慢了，過去我認(rèn)為質(zhì)粒會有兩條帶，超螺旋構(gòu)象的，和松弛構(gòu)象的，但做的多了就知道了，5K的質(zhì)粒跑出10k的大小都可能正常，酶切后如果大小不對，那就有問題了，為此我打過幾個質(zhì)粒提取試劑盒的技術(shù)支持的電話，也測序驗證過一些。不要盡相信分子克隆上的話。 |
2樓2012-11-28 19:16:36
cicelyzh
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3樓2012-11-29 07:51:50
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