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zhougzhou至尊木蟲(chóng) (正式寫手)
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[求助]
GFP重組表達(dá)質(zhì)粒電泳問(wèn)題
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我構(gòu)建的GFP與一個(gè)基因的重組表達(dá)載體，正常下應(yīng)該是5kbp左右，但每次提質(zhì)粒后電泳都顯示在2500bp左右有條強(qiáng)帶，而5kbp左右也有條帶但較弱。請(qǐng)問(wèn)這是正常的嗎？急求答案。 PS：小弟接著下去要做轉(zhuǎn)染，以前做成功過(guò)（能發(fā)綠色熒光），但最近怎么不發(fā)光了，所以想問(wèn)是否構(gòu)建質(zhì)粒出了問(wèn)題。 |
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cicelyzh
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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3樓2012-11-29 07:51:50
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zhougzhou: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-11-30 03:39:49
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zhougzhou: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-11-30 03:39:49
| 沒(méi)做酶切的質(zhì)粒電泳是不能判斷質(zhì)粒大小的，無(wú)論是跑快了還是跑慢了，過(guò)去我認(rèn)為質(zhì)粒會(huì)有兩條帶，超螺旋構(gòu)象的，和松弛構(gòu)象的，但做的多了就知道了，5K的質(zhì)粒跑出10k的大小都可能正常，酶切后如果大小不對(duì)，那就有問(wèn)題了，為此我打過(guò)幾個(gè)質(zhì)粒提取試劑盒的技術(shù)支持的電話，也測(cè)序驗(yàn)證過(guò)一些。不要盡相信分子克隆上的話。 |
2樓2012-11-28 19:16:36
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