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2008101111金蟲 (正式寫手)
學(xué)術(shù)江湖混子
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[求助]
[求助/交流]如何提高自己DIY的柱式膠回收試劑盒的回收效率？
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 最近自己搜集了柱式膠回收試劑盒各個(gè)溶劑的配方，經(jīng)過幾輪的試驗(yàn)，總算能夠回收到PCR產(chǎn)物，但是回收的效率估計(jì)只有50%左右，敢問各位有沒有好的建議和方法來提高一下回收效率？或者有更好的配方給我建議一下？ |
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 分子生化實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)積累 |
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hl16010921
木蟲 (正式寫手)
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2008101111: 金幣+2, ★★★很有幫助 2013-10-14 22:19:44
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2008101111: 金幣+2, ★★★很有幫助 2013-10-14 22:19:44
| 我感覺樓主的回收效率已經(jīng)很高了。但以前做的時(shí)候想到的提高效率的也就幾個(gè)方面：1.溶膠。這一部分可以適當(dāng)提高溫度。2.上柱。由于是高鹽結(jié)合，低鹽洗脫，適當(dāng)提高鹽濃度應(yīng)該有利（推測）3.洗脫。我以前一直用純水洗脫而且一定要65到70攝氏度水浴，適當(dāng)延長時(shí)間。估計(jì)這步是影響收率的關(guān)鍵。由于洗脫體積一般都很小30~50ul，柱心和邊緣的洗脫效果是不同的，適當(dāng)加大洗脫體積會(huì)提高總收率，但濃度下降。重復(fù)洗脫的作用是有的但不明顯。能想到的就這些。僅供樓主參考。 |
4樓2013-09-05 10:55:13
gyesang
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2樓2013-09-04 21:00:03
2008101111
金蟲 (正式寫手)
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3樓2013-09-04 21:13:11
Haibara_Ai
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2008101111: 金幣+2, ★★★很有幫助 2013-10-14 22:20:28
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這個(gè)可以么？ 5.5 M guanidine thiocyanate (GuSCN) 20 mM Tris HCl pH 6.6 |
5樓2013-09-05 11:06:38
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