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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 材料區(qū) » 微米和納米 » 合成表征 » 膠體金連成dimer
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nihaotianjia金蟲 (小有名氣)
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[求助]
膠體金連成dimer
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| 想問下膠體金如何連成dimer？具體方法~~謝謝 |
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nihaotianjia
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9樓2013-09-09 21:25:27
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【答案】應助回帖
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（一）膠體金的制備 1．制備方法膠體金的制備多采用還原法。氯金酸（HauC14）是主要還原材料，常用還原劑有檸檬酸鈉、鞣酸、抗壞血酸、白磷、硼氫化鈉等。根據還原劑 類型以及還原作用的強弱，可以制備0.8nm～150nm不等的膠體金。 最常用的制備方法為檸檬酸鹽還原法。 具體操作方法如下： （1）將HauC14先配制成0.01％水溶液，取100ml加熱至沸。 （2）攪動下準確加入一定量的1％檸檬酸三鈉（Na3C6H5O7·2H2O）水溶液。 （3）繼續(xù)加熱煮沸15min。此時可觀察到淡黃色的氯金酸水溶液在檸檬酸鈉加入后很快變灰色，續(xù)而轉成黑色，隨后逐漸穩(wěn)定成紅色。全過程約2～3min。 （4）冷卻至室溫后用蒸餾水恢復至原體積。 用此法可制備16～147nm粒徑的膠體金。金顆粒的大小取決于制備時加入的檸檬酸三鈉的量。 （二）免疫金的制備 1．用0.2mol/LK2CO3或0.1mol/LHC1調節(jié)膠體金溶液的pH至選定值。原則上可選擇待標記蛋白質等電點，也可略為偏堿。但通常最適反應pH往往需經多次試驗才能確定。 在調節(jié)膠體金的pH值時應注意，膠體金會阻塞pH計的電極，不可直接將電極插入膠體金溶液中，宜先用終濃度為0.15的聚乙二醇（PEG，20000）穩(wěn)定膠體金后，再膠體金的pH值。 2．將1/10體積的合適濃度的蛋白質溶液加于膠體金溶液中，放置室溫反應2～5min。 由于鹽類成分能影響膠體金對蛋白質的吸附，并可使膠體金聚沉，因此待標記蛋白質溶液若含有較高的離子濃度，應在標記前先對低離子強度的蒸餾水透析去鹽。 3．加入濃度為0.2％的PEG或BSA以飽和游離的膠體金。 4．離心分離，去除上清液中未結合的蛋白質。離心條件視膠體金顆粒的粒徑而異：對5nm金顆粒可選用40000r/min離心1h；8nm金顆粒用25000r/min離心45min；14nm金顆粒用25000r/min離心30min，40nm金顆粒用15000r/min離心30min。 5．輕吸上清液。沉淀用含PEG或BSA的緩沖液懸浮，恢復原體積后再離心。如此洗滌2～4次。以徹底除去未結合的蛋白質。 6．免疫金復合物最終用稀釋液配制成工作濃度保存。稀釋液通常是加入穩(wěn)定劑的緩沖液。緩沖溶液常用中性的PBS或Tris緩沖液。 多種蛋白質、葡聚糖、PEG2000、明膠等均為良好的高分子穩(wěn)定劑，PEG和BSA是最常用的穩(wěn)定劑。穩(wěn)定劑有兩大作用：一為保護膠體金的穩(wěn)定性，使之便于長期保存；二為防止或減少免疫金復合物的非特異性吸附反應。穩(wěn)定劑的合理選擇是十分重要的，不適當?shù)姆�(wěn)定劑有時也會導致非特異性反應。 |
2樓2013-09-09 17:35:36
zhenwuhuang
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3樓2013-09-09 18:00:22
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4樓2013-09-09 18:05:16
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