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Apollo919新蟲 (初入文壇)
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[求助]
引物設(shè)計
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CCTTCAAACACCAATCGCGAGCTGCCAAGCTAAAATACTTGTCAGCTCACGATGTAAAAATTTAGCGAAG TTTTCACAATTTATGATTCTATTTCTCGCATTTACTGTTATAATATTTACTGTATCAATATATAGGAGGA ATTTTTGTAATGAAAATTATTGCATATGCTGTACGTGATGACGAACGTCCATTCTTCGATACTTGGATGA AAGAAAACCCAGATGTTGAAGTTAAATTAGTTCCAGAATTACTTACTGAAGACAACGTTGACTTAGCTAA AGGCTTCGACGGTGCCGATGTATACCAACAAAAGGACTATACTGCTGAAGTATTGAACAAGTTAGCCGAC GAAGGGGTTAAGAACATCTCTCTTCGTAACGTTGGTGTTGATAACTTGGACGTTCCTACTGTTAAAGCAC GTGGCTTAAACATTTCTAACGTACCTGCATACTCACCAAATGCGATTGCTGAATTATCAGTAACGCAATT GATGCAATTATTACGTCAAACCCCATTGTTCAACAAGAAGTTAGCTAAGCAAGACTTCCGTTGGGCACCA GATATTGCCAAGGAATTAAACACCATGACTGTTGGTGTTATCGGTACTGGTCGGATTGGCCGTGCTGCCA TCGATATTTTCAAAGGCTTCGGCGCTAAGGTTATCGGTTACGATGTTTACCGGAATGCTGAACTTGAAAA GGAAGGCATGTACGTTGACACCTTGGACGAATTATACGCCCAAGCTGATGTTATCACGTTACACGTTCCT GCATTGAAGGATAACTACCACATGTTGAATGCGGATGCCTTCAGCAAGATGAAAGATGGCGCCTACATCT TGAACTTTGCTCGTGGGACACTCATCGATTCAGAAGACTTGATCAAAGCCTTAGACAGTGGCAAAGTTGC CGGTGCCGCTCTTGATACGTATGAATACGAAACTAAGATCTTCAACAAAGACCTTGAAGGTCAAACGATT GATGACAAGGTCTTCATGAACTTGTTCAACCGCGACAATGTTTTGATTACACCACATACGGCTTTCTACA CTGAAACTGCCGTTCACAACATGGTGCACGTTTCAATGAACAGTAACAAACAATTCATCGAAACTGGTAA AGCTGACACACAAGTTAAGTTTGATTAATCTCGATTATCACTGAAAATGGCGTCACTCATCTGAGTGACG CCATTTTTTATGCTTTCACCTAAATGGGGCCTTTTCGAAGCGTTAACCCCAAGCGTACTTTCAATGCTGT TATTATCCATAACAAAAAGCCCACAATAGAGCTGGTTGC 編碼目標蛋白是從150-1145共996bp 332個氨基酸 想在5‘端加BamH I 在3’端加Hind III 求各路大俠設(shè)計下 不勝感激 [ Last edited by Apollo919 on 2013-9-16 at 21:20 ] |
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2樓2013-09-16 22:22:14
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【答案】應(yīng)助回帖
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myprayer: 金幣+1, 贈人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-17 14:44:25
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D-lactate dehydrogenase 括號內(nèi)是引物，閱讀框自己矯正。 (GGATCC-ATGAAAATTATTGCATATGCTGTA) CGTGATGACGAACGTCCATTCTTCGATACTTGGATGAAAGAAAACCCAGATGTTGAAGTTAAATTAGTTCCAGAATTACTTACTGAAGACAACGTTGACTTAGCTAAAGGCTTCGACGGTGCCGATGTATACCAACAAAAGGACTATACTGCTGAAGTATTGAACAAGTTAGCCGACGAAGGGGTTAAGAACATCTCTCTTCGTAACGTTGGTGTTGATAACTTGGACGTTCCTACTGTTAAAGCACGTGGCTTAAACATTTCTAACGTACCTGCATACTCACCAAATGCGATTGCTGAATTATCAGTAACGCAATTGATGCAATTATTACGTCAAACCCCATTGTTCAACAAGAAGTTAGCTAAGCAAGACTTCCGTTGGGCACCAGATATTGCCAAGGAATTAAACACCATGACTGTTGGTGTTATCGGTACTGGTCGGATTGGCCGTGCTGCCATCGATATTTTCAAAGGCTTCGGCGCTAAGGTTATCGGTTACGATGTTTACCGGAATGCTGAACTTGAAAAGGAAGGCATGTACGTTGACACCTTGGACGAATTATACGCCCAAGCTGATGTTATCACGTTACACGTTCCTGCATTGAAGGATAACTACCACATGTTGAATGCGGATGCCTTCAGCAAGATGAAAGATGGCGCCTACATCTTGAACTTTGCTCGTGGGACACTCATCGATTCAGAAGACTTGATCAAAGCCTTAGACAGTGGCAAAGTTGCCGGTGCCGCTCTTGATACGTATGAATACGAAACTAAGATCTTCAACAAAGACCTTGAAGGTCAAACGATTGATGACAAGGTCTTCATGAACTTGTTCAACCGCGACAATGTTTTGATTACACCACATACGGCTTTCTACACTGAAACTGCCGTTCACAACATGGTGCACGTTTCAATGAACAGTAACAAACAATTCATCGAAACTGGTAA (AGCTGACACACAAGTTAAGTTTGAT-AAGCTT) |
3樓2013-09-16 22:32:07
Apollo919
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ATGAAAATTATTGCATATGCTGTACGTGATGACGAACGTCCATTCTTCGATACTTGGATGAAAGAAAACCCAGATGTTGAAGTTAAATTAGTTCCAGAATTACTTACTGAAGACAACGTTGACTTAGCTAAAGGCTTCGACGGTGCCGATGTATACCAACAAAAGGACTATACTGCTGAAGTATTGAACAAGTTAGCCGACGAAGGGGTTAAGAACATCTCTCTTCGTAACGTTGGTGTTGATAACTTGGACGTTCCTACTGTTAAAGCACGTGGCTTAAACATTTCTAACGTACCTGCATACTCACCAAATGCGATTGCTGAATTATCAGTAACGCAATTGATGCAATTATTACGTCAAACCCCATTGTTCAACAAGAAGTTAGCTAAGCAAGACTTCCGTTGGGCACCAGATATTGCCAAGGAATTAAACACCATGACTGTTGGTGTTATCGGTACTGGTCGGATTGGCCGTGCTGCCATCGATATTTTCAAAGGCTTCGGCGCTAAGGTTATCGGTTACGATGTTTACCGGAATGCTGAACTTGAAAAGGAAGGCATGTACGTTGACACCTTGGACGAATTATACGCCCAAGCTGATGTTATCACGTTACACGTTCCTGCATTGAAGGATAACTACCACATGTTGAATGCGGATGCCTTCAGCAAGATGAAAGATGGCGCCTACATCTTGAACTTTGCTCGTGGGACACTCATCGATTCAGAAGACTTGATCAAAGCCTTAGACAGTGGCAAAGTTGCCGGTGCCGCTCTTGATACGTATGAATACGAAACTAAGATCTTCAACAAAGACCTTGAAGGTCAAACGATTGATGACAAGGTCTTCATGAACTTGTTCAACCGCGACAATGTTTTGATTACACCACATACGGCTTTCTACACTGAAACTGCCGTTCACAACATGGTGCACGTTTCAATGAACAGTAACAAACAATTCATCGAAACTGGTAAAGCTGACACACAAGTTAAGTTTGAT 這是我要P的共996個bp的目的基因，希望能幫設(shè)計一對引物，謝謝 |
4樓2013-09-17 10:10:05
Apollo919
新蟲 (初入文壇)
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ATGAAAATTATTGCATATGCTGTACGTGATGACGAACGTCCATTCTTCGATACTTGGATGAAAGAAAACCCAGATGTTGAAGTTAAATTAGTTCCAGAATTACTTACTGAAGACAACGTTGACTTAGCTAAAGGCTTCGACGGTGCCGATGTATACCAACAAAAGGACTATACTGCTGAAGTATTGAACAAGTTAGCCGACGAAGGGGTTAAGAACATCTCTCTTCGTAACGTTGGTGTTGATAACTTGGACGTTCCTACTGTTAAAGCACGTGGCTTAAACATTTCTAACGTACCTGCATACTCACCAAATGCGATTGCTGAATTATCAGTAACGCAATTGATGCAATTATTACGTCAAACCCCATTGTTCAACAAGAAGTTAGCTAAGCAAGACTTCCGTTGGGCACCAGATATTGCCAAGGAATTAAACACCATGACTGTTGGTGTTATCGGTACTGGTCGGATTGGCCGTGCTGCCATCGATATTTTCAAAGGCTTCGGCGCTAAGGTTATCGGTTACGATGTTTACCGGAATGCTGAACTTGAAAAGGAAGGCATGTACGTTGACACCTTGGACGAATTATACGCCCAAGCTGATGTTATCACGTTACACGTTCCTGCATTGAAGGATAACTACCACATGTTGAATGCGGATGCCTTCAGCAAGATGAAAGATGGCGCCTACATCTTGAACTTTGCTCGTGGGACACTCATCGATTCAGAAGACTTGATCAAAGCCTTAGACAGTGGCAAAGTTGCCGGTGCCGCTCTTGATACGTATGAATACGAAACTAAGATCTTCAACAAAGACCTTGAAGGTCAAACGATTGATGACAAGGTCTTCATGAACTTGTTCAACCGCGACAATGTTTTGATTACACCACATACGGCTTTCTACACTGAAACTGCCGTTCACAACATGGTGCACGTTTCAATGAACAGTAACAAACAATTCATCGAAACTGGTAAAGCTGACACACAAGTTAAGTTTGAT 這是我要p的目的基因，你設(shè)計的上游引物咋和5‘端的一樣呢？求解釋 |
5樓2013-09-17 10:31:41
【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵回帖交流！ 2013-09-18 10:20:28
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正向引物：5'-3' CGGGATCCATGAAAATTATTGCATATGCTG GC% 40% Tm=65 反向引物：5'-3' CCCAAGCTTATCAAACTTAACTTGTGTGTCAGC GC% 42% Tm=64 GGATCC是BamHI位點，前面的CG是它的保護堿基，不加的話酶切會很困難，AAGCTT是HindIII,后面的GGG也是它的保護堿基。你的引物一定要和你目的片段的序列是一樣的，這樣才可以擴增出來 |
6樓2013-09-17 16:30:45
舒?zhèn)?/a>
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7樓2013-09-17 19:47:40
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8樓2013-09-18 10:16:04
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