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xiaoganghehe

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[交流] 大腸桿菌中beta-半乳糖苷酶的困惑

小弟是學(xué)材料的，對(duì)微生物這塊一竅不通，但老師要求我做微生物傳感器，我也只能硬著頭皮做了。
   最近有個(gè)想法，通過(guò)顏色的變化來(lái)反應(yīng)金屬離子的毒性。無(wú)意中看到有人用ONPG來(lái)檢測(cè)beta-半乳糖苷酶的活性，并且文獻(xiàn)上說(shuō)對(duì)大腸桿菌而言beta-半乳糖苷酶是胞內(nèi)酶。然后設(shè)想：金屬離子能改變大腸桿菌細(xì)胞壁的通透性，通透性的改變能使細(xì)胞內(nèi)的beta-半乳糖苷酶釋放到細(xì)胞外。而beta-半乳糖苷酶可以催化水解ONPG，生成黃色的物質(zhì)，該黃色物質(zhì)在波長(zhǎng)420nm處存在特征吸收峰。那么根據(jù)顏色的深淺及峰的強(qiáng)度就能判斷出金屬離子對(duì)大腸桿菌的毒性。
   為了使大腸桿菌產(chǎn)生beta-半乳糖苷酶，我在培養(yǎng)基中加入乳糖。培養(yǎng)后，用0.8%的NaCl溶液清洗離心分離，最后將細(xì)菌沉淀分散到PBS溶液中。但令人尷尬的是，即使在不存在金屬離子的情況下，往菌液中加入ONPG，就可以觀(guān)察到明顯的黃色變化，并且在波長(zhǎng)420nm處可以觀(guān)察到水解產(chǎn)物的特征吸收峰。
   因此很困惑：beta-半乳糖苷酶是胞內(nèi)酶還是胞外酶？是不是有的大腸桿菌中beta-半乳糖苷酶是胞內(nèi)的，而有的則是胞外的？該如何理解胞內(nèi)酶和胞外酶？

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1樓 2013-09-24 13:47:04

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liuyuexinfei

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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
xiaoganghehe: 金幣+2 2013-09-26 09:35:53

引用回帖:

5樓: Originally posted by xiaoganghehe at 2013-09-25 11:04:52
是嗎？！您能具體描述一下嗎？...

我們也是使用ONPG測(cè)定B-半乳糖苷酶的活性，發(fā)現(xiàn)只要細(xì)菌中含有這個(gè)酶，加進(jìn)去就會(huì)變色，并且這個(gè)酶的活性非常高，反應(yīng)速率很快，其實(shí)這個(gè)酶是一個(gè)復(fù)合酶，很大的，B-半乳糖苷酶只是其中一部分，還有一部分是a-半乳糖苷酶。我們做的試驗(yàn)比較多，但是樓主的想法還是不錯(cuò)的，關(guān)鍵是怎么證明2樓的想法是關(guān)鍵

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7樓2013-09-26 09:19:40

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xiaoganghehe: 金幣+2, 有幫助，謝謝這位蟲(chóng)友 2013-09-25 07:45:26
laozuzunzhe: 金幣+1, 鼓勵(lì)應(yīng)助！ 2013-09-25 16:24:30

即使是胞內(nèi)酶，底物可以進(jìn)入細(xì)胞，被反應(yīng)后，顯色產(chǎn)物也可以從細(xì)胞出來(lái)。

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2樓2013-09-24 22:05:49

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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
laozuzunzhe: 金幣+1, 鼓勵(lì)應(yīng)助！ 2013-09-25 16:24:41

有道理，我們也做個(gè)這個(gè)實(shí)驗(yàn)，也發(fā)現(xiàn)了這個(gè)現(xiàn)象

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4樓2013-09-25 10:54:16

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引用回帖:

4樓: Originally posted by liuyuexinfei at 2013-09-25 10:54:16
有道理，我們也做個(gè)這個(gè)實(shí)驗(yàn)，也發(fā)現(xiàn)了這個(gè)現(xiàn)象

是嗎？！您能具體描述一下嗎？

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5樓2013-09-25 11:04:52

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