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[交流]
大腸桿菌中beta-半乳糖苷酶的困惑
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小弟是學材料的，對微生物這塊一竅不通，但老師要求我做微生物傳感器，我也只能硬著頭皮做了。 最近有個想法，通過顏色的變化來反應金屬離子的毒性。無意中看到有人用ONPG來檢測beta-半乳糖苷酶的活性，并且文獻上說對大腸桿菌而言beta-半乳糖苷酶是胞內(nèi)酶。然后設想：金屬離子能改變大腸桿菌細胞壁的通透性，通透性的改變能使細胞內(nèi)的beta-半乳糖苷酶釋放到細胞外。而beta-半乳糖苷酶可以催化水解ONPG，生成黃色的物質(zhì)，該黃色物質(zhì)在波長420nm處存在特征吸收峰。那么根據(jù)顏色的深淺及峰的強度就能判斷出金屬離子對大腸桿菌的毒性。 為了使大腸桿菌產(chǎn)生beta-半乳糖苷酶，我在培養(yǎng)基中加入乳糖。培養(yǎng)后，用0.8%的NaCl溶液清洗離心分離，最后將細菌沉淀分散到PBS溶液中。但令人尷尬的是，即使在不存在金屬離子的情況下，往菌液中加入ONPG，就可以觀察到明顯的黃色變化，并且在波長420nm處可以觀察到水解產(chǎn)物的特征吸收峰。 因此很困惑：beta-半乳糖苷酶是胞內(nèi)酶還是胞外酶？是不是有的大腸桿菌中beta-半乳糖苷酶是胞內(nèi)的，而有的則是胞外的？該如何理解胞內(nèi)酶和胞外酶？ |
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
xiaoganghehe: 金幣+3 2013-09-26 15:38:26
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
xiaoganghehe: 金幣+3 2013-09-26 15:38:26
關于這個問題，我回到了好幾次了， 學過生化的都知道乳糖操縱子，可能僅僅是應付考試而已，學過就忘了。 beta-半乳糖苷酶實際上還需要另外兩個酶組成beta-半乳糖苷酶轉運體系。 這體系中有一個通透酶，可以將底物從胞外轉運到胞內(nèi)。 即使沒有這個轉運過程，一些現(xiàn)在未知的機制也可能是屬于胞內(nèi)酶同樣表達出胞外酶的活性。 所以，你的改變膜通透性的思路是不合適的。 [ Last edited by mizhoulong on 2013-9-26 at 14:48 ] |
9樓2013-09-26 14:46:35
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