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MTT實(shí)驗(yàn)求助 已有1人參與
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我是個(gè)細(xì)胞菜鳥(niǎo)，最近準(zhǔn)備嘗試做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，關(guān)于MTT有些問(wèn)題不太明白，請(qǐng)不吝賜教。 先大概介紹一下研究目的：已知某因子可促進(jìn)某細(xì)胞增殖，也有報(bào)道該因子可激活MAPK，那么我想采用MAPK拮抗劑來(lái)驗(yàn)證一下該因子刺激細(xì)胞增殖的作用是否與MAPK有關(guān)。MTT實(shí)驗(yàn)中我不明白的有： 1、該因子是否需要做濃度梯度和時(shí)間梯度？還是采用多濃度1個(gè)時(shí)間點(diǎn)，或是1個(gè)濃度多個(gè)時(shí)間點(diǎn)？ 2、如果是濃度和時(shí)間都做梯度的話，那MAPK抑制劑全都要加嗎？那樣的話感覺(jué)內(nèi)容很混亂。是不是應(yīng)該先選出一個(gè)最佳濃度和最佳作用時(shí)間，在這個(gè)條件下觀察抑制劑的作用？ 3、加MAPK抑制劑應(yīng)該是在加該因子之前把，那應(yīng)該提前多久加呢？30 min？ 1 h？ 4、加該因子前，需要把抑制劑吸出來(lái)嗎？ 5、只做MTT實(shí)驗(yàn)?zāi)芊裾f(shuō)明我的研究目的？有沒(méi)有必要再檢測(cè)該因子作用后細(xì)胞中MAPK的活性或表達(dá)變化？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
| MTT只是測(cè)量藥物對(duì)細(xì)胞活力的指標(biāo)，我們實(shí)驗(yàn)室這方面做很多，首先你要用MTT測(cè)一下這種因子對(duì)細(xì)胞增殖的影響，盡管人家做過(guò)了你也要做一下。一般都是測(cè)12h、24h細(xì)胞的活力，MAPK肯定得刷出最適合的濃度，然后時(shí)間梯度一般選用24h，而關(guān)于加抑制劑的時(shí)間你應(yīng)該查閱相關(guān)文獻(xiàn)，這就比較專(zhuān)業(yè)啦。MTT不能說(shuō)明你研究的目的，只算是實(shí)驗(yàn)的一個(gè)驗(yàn)證性的一部分，具體的還有后續(xù)測(cè)量相關(guān)蛋白的表達(dá)。我也是菜鳥(niǎo)，加油呀 |
6樓2014-12-27 14:59:31
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