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crystalwby銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
納米金標(biāo)記DNA然后退火使聚集的問(wèn)題
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我是用TCEP法標(biāo)記納米金的，納米金不是自己合成的是在Sigma上面買(mǎi)的，10nm。 之前標(biāo)記DNA之后通過(guò)退火就可以使DNA雜交促使納米金聚集----很經(jīng)典的。 我的反應(yīng)體系環(huán)境就是25mM Tris，200mM NaCl。 后來(lái)第一瓶納米金用完了，在Sigma上面又買(mǎi)了一瓶新的，再標(biāo)記之后用同樣的條件退火，納米金就再不能很快聚集了。 增大NaCl的濃度，從200mM增大到400mM，可以看到雜交情況是越來(lái)越好的，雖然都沒(méi)有達(dá)到整個(gè)液體顏色不紅。但是只要到500mM，就是納米金本身的不可逆聚集了。合適的鹽濃度怎么都調(diào)不好！ 第一瓶納米金標(biāo)記了DNA的還剩了一些，最初在25mM Tris，200mM NaCl條件下是可以順利聚集的，我有半個(gè)月沒(méi)有做實(shí)驗(yàn)，半個(gè)月后再用那些原本可以聚集的，退火之后發(fā)現(xiàn)也不能聚集了��！這是什么原因啊。。。 我把我反應(yīng)的Tris buffer和NaCl都重新配了還是不能聚集�。� 納米金會(huì)變嗎？？？ 有沒(méi)有蟲(chóng)友能幫我解答一下，我在補(bǔ)實(shí)驗(yàn)，好急。實(shí)驗(yàn)都重復(fù)不出來(lái)了！ [ Last edited by crystalwby on 2013-10-5 at 13:58 ] |
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