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lantianjesus新蟲 (小有名氣)
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[交流]
做吸附材料時(shí),出現(xiàn)了很多問題,希望高手提供寶貴意見 已有4人參與
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以前從未接觸吸附領(lǐng)域,很多都不懂,近期實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)了很多問題,希望蟲友指教: 1. 我用紫外法測(cè)吸附蛋白質(zhì)濃度,結(jié)果做了好幾次,吸附后比吸附前濃度還大,蛋白質(zhì)溶液用實(shí)驗(yàn)室超純水機(jī)產(chǎn)水配置,PH6.6。是不是必須用緩沖液呢?用哪種緩沖液比較好呢? 2. 再做蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)候,我是用1mg/mlBSA溶液,稀釋不同倍數(shù)(約0-1mg/ml)后側(cè)OD值,為什么線性很差呢?呈指數(shù)形式。 |
銅蟲 (正式寫手)
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| 蛋白質(zhì)一般都非常脆弱,容易變性,在變性過程中,蛋白質(zhì)外面所含的生色基團(tuán)有所不同,甚至能超過你吸附后的量,所以做蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)最基本的要求是對(duì)其達(dá)到穩(wěn)定。緩沖溶液是最好也是常用的穩(wěn)定蛋白質(zhì)體系,一般有磷酸類、TRIS-鹽酸類等。pH值有6.8、7.0、7.2,甚至更大或更小,關(guān)鍵是看你的要求和在你要求范圍內(nèi),蛋白質(zhì)是否穩(wěn)定。還有做蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的時(shí)候,稀釋法的確是能導(dǎo)致你所做的情況。 |

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