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jiaoxiayoulu新蟲 (小有名氣)
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酵母轉(zhuǎn)化之后表現(xiàn)出抗性，但pcr無法驗(yàn)證出來！求解 已有1人參與
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請(qǐng)教各位蟲友： 我把工業(yè)釀酒酵母制成單倍體后，第一：我將KanMX基因轉(zhuǎn)化進(jìn)酵母，通過同源置換后敲除了某個(gè)基因！篩選后，挑出轉(zhuǎn)化子進(jìn)行抗G418液體培養(yǎng)，結(jié)果表現(xiàn)出抗性（對(duì)照組不能抗G418）。 第二 在此基礎(chǔ)上我進(jìn)行了PCR驗(yàn)證 引物分別為 a b c d ,其中a,d分別為被敲除基因的上下游引物；b,c分別為KanMX內(nèi)部的引物。 我的問題在于 PCR后有ab,cd擴(kuò)增出的條帶（但比預(yù)期的條帶略大一些），此外 不管怎樣P了5,6次就是P不出ad條帶（我用未做轉(zhuǎn)化的基因組模板P了ad，結(jié)果有條帶出現(xiàn)）！ 我現(xiàn)在非常的納悶，問題不知出在哪里，請(qǐng)求大家?guī)兔Ψ治龇治觯? |
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