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能否用降落PCR來進(jìn)行半定量實(shí)驗(yàn)
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我是新手，最近在做半定量PCR 如圖，三個(gè)基因的退火溫度都是用梯度PCR選出來的退火溫度，溫度確定的條件是目的產(chǎn)物擴(kuò)增效率最高，相對(duì)引物二聚體來說較亮。 10-11是11號(hào)做出來的圖片，從上到下分別對(duì)應(yīng)G,P,C三個(gè)基因。從左到右每一個(gè)孔依次增加兩個(gè)循環(huán)。循環(huán)數(shù)為17,19,21,23,25,27,29,31,33,35,37,39,41,43,45 10-12是今天做出來的圖，這張圖下邊倒數(shù)第二帶亮亮的，這是加樣孔（不知為何加樣孔如此亮）。從上到下依舊是G,P,C三個(gè)基因。同11號(hào)相比，所加入的模板濃度和體積都沒有變化，引物濃度降為11號(hào)引物濃度的一半。1,2孔為一個(gè)循環(huán)數(shù)，3,4孔為一個(gè)循環(huán)數(shù)，依次類推，共6個(gè)循環(huán)數(shù)。從左到右，依次增加三個(gè)循環(huán)。循環(huán)數(shù)為29,32,35,38,41,44 所得的結(jié)果都不好。我是不是該換引物了。引物直接從外文文獻(xiàn)里找，或者我能否用降落PCR來進(jìn)行半定量PCR實(shí)驗(yàn)。求高手指導(dǎo)。 10-11.JPG 10-12.JPG [ Last edited by 月亮先生 on 2013-10-12 at 22:49 ] |
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3樓2013-10-13 20:16:10
2樓2013-10-13 10:18:40
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