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PGEX-4T-1載體表達(dá)產(chǎn)物，GST標(biāo)簽的切除
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最近做一個(gè)蛋白連接到GEX-4T-1上進(jìn)行表達(dá)，但發(fā)現(xiàn)該蛋白檢測(cè)人血清中的抗體的時(shí)候，有很高的假陽(yáng)出現(xiàn)。現(xiàn)在考慮可能是GST標(biāo)簽的原因，因此想切除此標(biāo)簽。我們論壇上的蟲友不知道有沒有做過相關(guān)的，麻煩指導(dǎo)一下 1. 選用凝血酶進(jìn)行切除， 看有人用人凝血酶（sigmaT6884 ），不知道效率如何 2.用GST純化以后再切，切了以后再過柱子，流穿出來的就是我的樣品，但凝血酶怎么除掉 3. 這樣的話成本會(huì)不會(huì)很高 另外，有沒有蟲友有說明書，可不可以分享一下 不勝感激 |
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2樓2013-10-16 15:40:21
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禁蟲 (初入文壇)
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3樓2013-10-16 22:42:31
fuyuandj86
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4樓2013-10-17 01:08:12
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你現(xiàn)在也只是懷疑是因?yàn)槟愕臉?biāo)簽影響你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，你可以做對(duì)照看下，你可以用其他的帶GST的融合蛋白做為陰性對(duì)照看看，如果為陽(yáng)性那就說明是你的標(biāo)簽影響，如果陰性對(duì)照成立就說明不是標(biāo)簽的影響撒，不要?jiǎng)硬粍?dòng)就切標(biāo)簽。 |
9樓2013-10-17 12:49:06
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