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[求助]
PGEX-4T-1載體表達(dá)產(chǎn)物，GST標(biāo)簽的切除
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最近做一個(gè)蛋白連接到GEX-4T-1上進(jìn)行表達(dá)，但發(fā)現(xiàn)該蛋白檢測(cè)人血清中的抗體的時(shí)候，有很高的假陽(yáng)出現(xiàn)�，F(xiàn)在考慮可能是GST標(biāo)簽的原因，因此想切除此標(biāo)簽。我們論壇上的蟲友不知道有沒(méi)有做過(guò)相關(guān)的，麻煩指導(dǎo)一下 1. 選用凝血酶進(jìn)行切除， 看有人用人凝血酶（sigmaT6884 ），不知道效率如何 2.用GST純化以后再切，切了以后再過(guò)柱子，流穿出來(lái)的就是我的樣品，但凝血酶怎么除掉 3. 這樣的話成本會(huì)不會(huì)很高 另外，有沒(méi)有蟲友有說(shuō)明書，可不可以分享一下 不勝感激 |
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 小Poo |
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夢(mèng)想很重要
禁蟲 (初入文壇)
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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3樓2013-10-16 22:42:31
2樓2013-10-16 15:40:21
fuyuandj86
版主 (著名寫手)
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4樓2013-10-17 01:08:12
bullfrog325
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-10-17 10:40:36
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-10-17 10:40:36
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樓主不如把GST換成HIS標(biāo)記, 首先你不確定這個(gè)假陽(yáng)是GST引起的(萬(wàn)一是蛋白本身折疊的問(wèn)題造成的呢?), 其次thrombin不一定好使(需要融合蛋白的結(jié)合部充分暴露在外面), 再有, 你也提到了, 切完后thrombin怎么去除掉也可能是個(gè)頭痛的問(wèn)題. 所以我建議樓主干脆換標(biāo)簽吧, 祝好運(yùn)! |
5樓2013-10-17 04:17:30
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