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落于忘川

銅蟲 (初入文壇)

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專業(yè): 生物化學(xué)

[求助] 關(guān)于蛋白鹽析的問(wèn)題

本人實(shí)驗(yàn)新手一個(gè)，以前也就是按著老師給的步驟做過(guò)本科生實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)在自己做發(fā)現(xiàn)好多基礎(chǔ)的問(wèn)題都搞不清楚，希望各位大神能指點(diǎn)一二，讓我這只小蟲子也略微對(duì)某些實(shí)驗(yàn)技能了解一些。
正題：在做酶的分離的時(shí)候準(zhǔn)備用硫酸銨鹽析，但是遇到幾個(gè)問(wèn)題：
1.分級(jí)分離是不是比直接確定一個(gè)硫酸銨的飽和濃度去鹽析要好些
2.現(xiàn)在在嘗試階段，如果想做分級(jí)分離的話要怎么確定一系列的濃度梯度呢？

本人想做正交試驗(yàn)探究提取條件，SOD的，已經(jīng)確定了一個(gè)因素是提取時(shí)緩沖液的量，正交試驗(yàn)個(gè)人覺(jué)得至少三個(gè)因素才有必要，所以在如果做分級(jí)的鹽析，能不能把第一次鹽析鹽濃度作為一個(gè)因素，第二個(gè)鹽濃度作為一個(gè)因素，以此類推，然后去正交？

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愛(ài)上一個(gè)認(rèn)真的消遣，用一朵花開的時(shí)間

1樓 2013-10-22 01:35:35

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

更深的藍(lán)hyp

銅蟲 (初入文壇)

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
137167741: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流~~ 2013-10-22 09:25:07
落于忘川: 金幣+1, ★有幫助 2013-10-23 01:41:03

針對(duì)第一問(wèn)題：分級(jí)分離要好，鹽濃度從小到大逐級(jí)分離，可以除去不相關(guān)的蛋白。
針對(duì)第二個(gè)：向攪拌的情況下向你的酶溶液中先加鹽，等看見(jiàn)沉淀時(shí)就停止加鹽，之后離心，對(duì)上清進(jìn)行測(cè)試。你也可以選擇20%-60%的鹽濃度進(jìn)行鹽析。

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回復(fù)此樓

2樓2013-10-22 08:32:15

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