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[求助] 菌懸液用液體無機鹽培養(yǎng)基制備行嗎？

對于菌懸液的制備，看了下書和一些帖子。歸納下，可分為2種方法。1.斜面培養(yǎng)基上的菌體加入生理鹽水或磷酸緩沖液后，用接種環(huán)刮菌苔，震蕩均勻得到一定濃度菌懸液。2.用LB或牛肉膏蛋白培養(yǎng)基培養(yǎng)到穩(wěn)定期時，離心收集菌體，再用生理鹽水或磷酸緩沖液洗菌體3次后重懸，制得菌懸液。我想問，能不能用無機鹽培養(yǎng)基（液體）代替生理鹽水或磷酸緩沖液做菌懸液？并且進一步用比濁法在菌密度和OD600之間建立的標(biāo)準曲線？

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1樓 2013-10-23 15:46:15

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laozuzunzhe: 金幣+4, 鼓勵熱心應(yīng)助！ 2013-10-23 22:37:24

還要看你的菌懸液制備的目的，一般用于保存的需要盡量降低代謝水平所以多用無菌水或甘油
如果是用來實驗在不影響實驗效果的情況下也是可以的至于對實驗有沒有影響
還應(yīng)該看整個實驗流程涉及的所有環(huán)節(jié)
例如平板計數(shù)的算菌濃的話，無機鹽離子會不會使菌體發(fā)生移動而影響計數(shù)也是不好說的
所以最好還是簡單一點的好

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2樓2013-10-23 17:17:48

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引用回帖:

2樓: Originally posted by chenbo1027 at 2013-10-23 17:17:48
還要看你的菌懸液制備的目的，一般用于保存的需要盡量降低代謝水平所以多用無菌水或甘油
如果是用來實驗在不影響實驗效果的情況下也是可以的至于對實驗有沒有影響
還應(yīng)該看整個實驗流程涉及的所有環(huán)節(jié)
例 ...

我是用于做實驗的，文獻中多用磷酸緩沖液做成菌懸液，接入新的無機鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)。然后，我想，磷酸緩沖液制備的菌懸液加入新的無機鹽培養(yǎng)基肯定改變了無機鹽培養(yǎng)基的成分，多少對菌體的培養(yǎng)有些影響，那直接用無機鹽培養(yǎng)基制成菌懸液不是更好？

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3樓2013-10-24 00:33:05

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yangjun130

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wjg811: 金幣+5 2013-10-31 11:49:48

文獻中為什么要那樣，肯定是計算好的，不了。你要想清楚為什么要那樣

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4樓2013-10-24 06:10:44

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引用回帖:

3樓: Originally posted by wjg811 at 2013-10-24 00:33:05
我是用于做實驗的，文獻中多用磷酸緩沖液做成菌懸液，接入新的無機鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)。然后，我想，磷酸緩沖液制備的菌懸液加入新的無機鹽培養(yǎng)基肯定改變了無機鹽培養(yǎng)基的成分，多少對菌體的培養(yǎng)有些影響，那直接用無機 ...

按照你說的，我感覺，如果還要洗滌離心那就用緩沖液好了，如果不需要洗滌那就用無機鹽也可以

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5樓2013-10-24 09:51:12

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請問制備菌懸液的磷酸緩沖液是怎么配置的，PH和濃度多大？我找文獻沒找到，你能把你看的文獻傳上來嗎?謝謝。

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6樓2013-10-24 10:02:56

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肯定可以的！前提是你需要消除你無機鹽培養(yǎng)基的干擾，特別是有顏色的培養(yǎng)基，你測一下空白培養(yǎng)基的相應(yīng)OD值就可以。

ps：你可以去看看OD值比濁法測菌體量的原理

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7樓2013-10-24 19:18:01

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5樓: Originally posted by chenbo1027 at 2013-10-24 09:51:12
按照你說的，我感覺，如果還要洗滌離心那就用緩沖液好了，如果不需要洗滌那就用無機鹽也可以...

它們之間的區(qū)別是不是這樣的？生理鹽水或緩沖液洗滌菌體，可以洗去表面活性劑和其他代謝產(chǎn)物之類的，得到的是純菌體，而且能保持細胞內(nèi)外滲透壓的平衡，有利于保持菌體活性。無機鹽培養(yǎng)基洗滌的話，可以也可以洗去表面活性之類的代謝產(chǎn)物，不過，用無機鹽培養(yǎng)基重懸的話（缺少碳源），就等于使細胞處于饑餓狀態(tài)了？無機鹽培養(yǎng)基也能保持細胞內(nèi)外滲透壓平很，細菌還是維持了活性。

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8樓2013-10-31 11:37:15

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6樓: Originally posted by 賢愚Libra at 2013-10-24 10:02:56
請問制備菌懸液的磷酸緩沖液是怎么配置的，PH和濃度多大？我找文獻沒找到，你能把你看的文獻傳上來嗎?謝謝。

不好意思，這兩天做實驗沒來及及時回復(fù)。緩沖液的配置我在文獻中也沒有看到具體制備方法的，而且不同細菌培養(yǎng)的話，似乎緩沖液PH值也有不同，通用的就是PH7.2。中文碩博論文有些寫了的，百度也有很多不同PH值緩沖液的配方�？茨阈枰啻驪H值的緩沖液。碩博論文中你搜搜應(yīng)該寫的較詳細，手頭現(xiàn)有一篇碩士論文，里面有個配方你自己下載吧。論文名“高效降解長慶石油污染物細菌系的篩選及其特性研究”45頁。

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9樓2013-10-31 11:46:09

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7樓: Originally posted by wangl2037 at 2013-10-24 19:18:01
肯定可以的！前提是你需要消除你無機鹽培養(yǎng)基的干擾，特別是有顏色的培養(yǎng)基，你測一下空白培養(yǎng)基的相應(yīng)OD值就可以。

ps：你可以去看看OD值比濁法測菌體量的原理

嗯，謝謝！看看原理覺得是可以的。只是沒看到有人這么做過，所有求證下高人們。因為自己不是微生物專業(yè)出身的，有點點沒底氣啊，呵呵

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10樓2013-10-31 11:49:30

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