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[求助]
細(xì)胞實(shí)驗(yàn),求高手指點(diǎn)用什么溶解棕櫚酸?
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| 棕櫚酸用DMSO溶解的不是太好,加的量大又可能影響細(xì)胞生長(zhǎng),請(qǐng)大家指點(diǎn),用什么溶解較好,又不影響細(xì)胞生長(zhǎng),萬(wàn)分感謝! |
銅蟲(chóng) (小有名氣)
| 我使用棕櫚酸處理的肝原代細(xì)胞,棕櫚酸濃儲(chǔ)液是200mM,用無(wú)水乙醇溶解。處理細(xì)胞使用的5%的不含脂肪酸的BSA稀釋的濃儲(chǔ)液(1:9),要在55度水浴鍋里溶解,然后再過(guò)濾分裝,防止反復(fù)凍融。 |
新蟲(chóng) (初入文壇)
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2型糖尿病是一種以糖脂代謝異常為主要表現(xiàn)的慢性代謝性疾病。在體外研究中,為了模擬2型糖尿病所致的器官損傷,除在細(xì)胞培養(yǎng)基中添加高濃度的葡萄糖外,通常需要添加高濃度的軟脂酸(棕櫚酸,Palmitic acid)或軟脂酸鈉(棕櫚酸鈉,Sodium palmitate)。然而,現(xiàn)有配制方法不當(dāng),市場(chǎng)上也無(wú)可直接使用的軟脂酸或軟脂酸鈉細(xì)胞添加劑,導(dǎo)致很多從事2型糖尿病的科研工作者無(wú)法順利開(kāi)展體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。 現(xiàn)有技術(shù)中,有人采用甲醇、乙醇、氫氧化鈉溶液等溶劑配制軟脂酸或軟脂酸鈉,其缺點(diǎn)是這些溶劑本身對(duì)細(xì)胞就有毒性,而且這些溶劑是否影響軟脂酸或軟脂酸鈉本身的性質(zhì)也不清楚。也有有人利用牛血清白蛋白(BSA)可與軟脂酸、或軟脂酸鈉結(jié)合的特點(diǎn),采用高濃度的BSA溶液配制軟脂酸、或軟脂酸鈉。上述方法的優(yōu)點(diǎn)是溶劑本身對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性,但仍存在以下問(wèn)題:1.對(duì)BSA未進(jìn)行甄選,導(dǎo)致其結(jié)合力不足;2.未掌握溶解軟脂酸或軟脂酸鈉的合適條件,不能充分溶解軟脂酸或軟脂酸鈉;3.配制的BSA-軟脂酸、或BSA-軟脂酸鈉溶液很快有固體析出,不能有效發(fā)揮脂毒性。 我們的團(tuán)隊(duì)經(jīng)過(guò)整整一年的研究和努力,發(fā)明了一種無(wú)溶劑毒性、無(wú)固體析出、可長(zhǎng)期保存的軟脂酸/軟脂酸鈉高脂細(xì)胞添加劑,并在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中成功驗(yàn)證和推廣(Diabetes, 2017; Basci Res Cardiol, 2013),目前已與多個(gè)實(shí)驗(yàn)室確定了長(zhǎng)期合作關(guān)系。 |
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