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| 有哪位大俠做過磁性納米顆粒固定化漆酶？為什么我將0.1- 0.25%的戊二醛直接加入到1ml0.5mol/ml的漆酶溶液（包含了5mg的氨基化的二氧化硅）中，在冰箱中固定化12個(gè)小時(shí)后測酶活回收率怎么只有3%？可以幫忙分析下嗎 |
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duruo
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2樓2013-10-29 14:35:21
3樓2013-10-29 15:15:56
duruo
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4樓2013-10-29 15:21:35
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取6mg氨基活化的磁性二氧化硅納米顆粒分散到1ml濃度為0.5mg/ml漆酶溶液（用磷酸鹽緩沖液配置）中，加入20ul，0.1%的戊二醛，然后將反應(yīng)混合物置于4℃的恒溫?fù)u床上反應(yīng)13h，其中搖床的轉(zhuǎn)速為150rpm。反應(yīng)結(jié)束時(shí)，用磁鐵吸住磁性微球，傾去上清液。用磷酸鹽緩沖液（0.1M，PH 7）洗滌磁性納米顆粒，并且記錄好每次洗滌的體積，直到上清液檢測不到蛋白質(zhì)為止。將所制備的固定化漆酶保存在磷酸鹽緩沖液中。 活性收率=固定上的酶活力/相同量的游離酶的活力 固定化酶的活力是在線測5min ,得到吸光值與時(shí)間的關(guān)系，算出活力 以前用先交聯(lián)喜干凈后再加酶進(jìn)行固定化，條件跟上面說的一樣，為什么這兩種方法測出來的活性收率這么低？真心希望得到你的指導(dǎo)，謝謝！ |
5樓2013-10-31 18:50:45
duruo
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【答案】應(yīng)助回帖
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鄧滿鳳(markar代發(fā)): 金幣+2, 感謝回帖交流！ 2013-11-01 15:40:51
鄧滿鳳(markar代發(fā)): 金幣+2, 感謝回帖交流！ 2013-11-01 15:40:51
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現(xiàn)在看有幾個(gè)可能： 1、固載酶含量測定有誤差，尤其是固載量很低的情況下，誤差就會更大； 2、戊二醛本身對酶活性有影響，這里主要是指酶被戊二醛交聯(lián)，因此導(dǎo)致的活性降低； 3、酶在固定化后，其最佳催化條件可能與游離態(tài)不同（比如溫度）。 解決方法： 1、提高酶固載量，建議你在偏酸條件下進(jìn)行反應(yīng)，有利于希夫堿的形成； 2、在不加磁性納米粒的情況下，看看戊二醛與酶反應(yīng)后酶的活力，排除戊二醛交聯(lián)的影響； 3、優(yōu)化固定化酶活力檢測條件 |
6樓2013-11-01 11:13:56
7樓2013-11-01 13:56:46
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