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冰河77960000新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助mtt實驗結果無法重復的原因
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本人在做多肽類藥物抗腫瘤方面的研究，通過分子生物學方法獲取多肽序列，然后化學合成多肽序列（吉爾生化合成），第一次合成的樣品用mtt方法檢測對多種癌細胞都有抑制生長的作用 ，這批多肽用了后，又合成了一些，第二次合成后mtt檢測的效果就跟第一次不一樣，抑制效果同比下降了許多 ，在一批合成檢測時對MCF-7抑制效果最明顯，第二批的藥對此細胞的作用就不明顯了，現在又合成了第三次，對mcf-7幾乎完全沒有作用 ，現在及其苦惱，可能的原因是什么，求助！（實驗前后持續(xù)了好到一年，mcf-7的細胞不是來源于同一批凍存細胞，mtt實驗操作過程是，第一天鋪96孔板，24h后加藥，藥用培養(yǎng)基梯度稀釋，在等48h加mtt，4h后用DMSO溶解，510/630nm處檢測吸光值，對照組吸光值控制在1.5以內） |
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冰河77960000
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先謝謝您的回復，因為我是第一次發(fā)帖子，收到回復還蠻激動的呢，其實我本來是研究抗菌肽的，因為有報道說部分抗菌肽有抗腫瘤的作用，所以我實驗也想往這方面嘗試一下，當然還沒有做太深，也沒有涉及到機制，就是先看看對細胞增殖的影響。對于您給的建議，我會在實驗中嘗試。我現在懷疑的地方主要在多肽上，因為我覺得mtt雖然穩(wěn)定性不好，但是在反應藥物能力的趨勢上不應該有太大差異，想請問您，我的多肽合成回來，稱重稀釋后（通常是1mg/ml的濃度配置2ml），要過膜除菌，過膜會不會明顯改變多肽濃度，還有公司在合成多肽時，每次合成的結果會不會有明顯差異？ 
3樓2013-11-05 18:46:28
houjinglhy
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【答案】應助回帖
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樓主在做多肽類的抗腫瘤藥物？ 據我所知，目前的多肽類抗腫瘤藥物只有促性腺激素釋放激素類（抑制性激素）和胸腺肽類（免疫刺激）的抗腫瘤藥物，但是這類藥物能通過抑制細胞增殖的方法來鑒定么？很好奇。當然不排除創(chuàng)新性的藥物。 我覺得首先得從實驗設計開始，確保實驗方法沒問題。 對于方法：1、細胞株的穩(wěn)定性很重要。最好用同一批凍存的細胞，且適應性培養(yǎng)一段時間的細胞。 2、最好用24孔板最MTT，避免操作時吸出結晶。 3、OD490可能相對敏感度更好點。 4、MTT本身的穩(wěn)定性不好，盡量多做復孔，多重復。判斷標準用IC50 |
2樓2013-11-04 17:17:37
houjinglhy
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4樓2013-11-05 19:12:05
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