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小木蟲論壇-學術(shù)科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 連接問題求助高手
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xiaopeiliang金蟲 (小有名氣)
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[求助]
連接問題求助高手
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最近在做一個連接，載體單酶切后，直接用T4連接酶連接涂板后居然不長，去磷酸化后就更不長了,更不要提連接目的片段的體系了，求解，糾結(jié)非常 |
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4樓2013-11-06 08:55:15
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kx444555: 金幣+2, 鼓勵交流 2013-11-06 08:28:22
xiaopeiliang: 金幣+2, ★有幫助, 嘗試不同去磷酸化量就是為了不過度去磷酸化，想找個合適的量，能夠讓載體自連幾個，不知道合理不，其它的都嘗試過啦，不是原因 2013-11-06 22:51:23
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| 確定T4 ligase是不是失效了。載體單酶切連接發(fā)生自連，去磷酸化是為了避免自連，當然不會長了。另外，你的感受態(tài)細胞是否好用，是否轉(zhuǎn)了為經(jīng)酶切的載體質(zhì)粒作為正對照？ |
3樓2013-11-06 07:44:23
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9樓2013-11-07 15:45:52
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