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sunshine111銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
總脫氫酶測定TTC法求助 已有1人參與
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各位蟲子們，我用TT法測總脫氫酶活性，連標(biāo)準(zhǔn)曲線都沒有做出來， 步驟如下： 方法與步驟 （1）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 ① 配制1mg/毫升TTC溶液：稱取50.0mgTTC，置于50毫升容量瓶中，以蒸餾水定容至刻度，避光了 ② 配制不同濃度TTC液：從1mg/毫升TTC液中分別吸取1、2、3、4、5、6、7毫升放入每個容積為50毫升的一組容量瓶中，以蒸餾水定容至50毫升，各瓶中TTC濃度分別為20、40、60、80、100、120、140μg/毫升。避光了 ③ 每只帶塞離心管內(nèi)加入Tris-HCl緩沖液2毫升＋2毫升蒸餾水＋1毫升TTC液（從低到高濃度依次加入）；對照管加入2毫升Tris-HCl緩沖液+3毫升蒸餾水，不加入TTC，所得每只離心管TTC含量分別為20、40、60、80、100、120、140μg。避光了 ④ 每管各加入5mg的鈉連二硫酸鈉，混合置于暗處37℃恒溫振蕩20min，使TTC全部還原，生成紅色的TF。 ⑤ 在各管加入5毫升丙酮（或正丁醇和甲醇），抽提TF。 ⑥ 放入37℃恒溫振蕩萃取10min。 在721型分光光度計上，于485nm波長下測光密度。 但是為毛線在80、100、120、140μg這幾個點的吸光度一直保持在0.16左右，不再繼續(xù)上升了 WHY???!! |
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2樓2015-07-27 15:52:51
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