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北京石油化工學院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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baima

應助: (幼兒園)
在線:
蟲號: 219034

[交流] 關(guān)于細菌基因組DNA抽提的問題!!!

各位大蝦,最近我提細菌基因組DNA出了問題,提出來后跑電泳是多條帶(見下圖),我以前一直都提得很好,方法和以前的一樣,可怎么提都是很多條帶,拜托各位幫我分析到底是什么原因,不勝感激!

方法:根據(jù)《新編分子生物學實驗指南》提供的方法進行。
(1)培養(yǎng)5 mL的細菌培養(yǎng)物至飽和狀態(tài)，取1.5 mL的培養(yǎng)物10000 r/min，離心2 min；
(2)沉淀物加入567uL的TE緩沖液，用吸管反復吹打使之重懸。加入3OuL 10％的SDS和3uL 20 mg/mL的蛋白酶K，混勻，于37℃ 溫育1h；
(3)加入100uL 5 mol/L NaC1，充分混勻，再加入8OuL CTAB/NaCl溶液，混勻，于65℃ 溫育1Omin；
(4)加入等體積的酚/氯仿/異戊醇，混勻，8 000r/min離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)入一個新管中；
(5)加入等體積的氯仿/異戊醇，混勻，8 000r/min離心5 min，將上清移入一只新管中；
(6)加人0．6體積的異丙醇，輕輕混合，室溫放置30min，直到DNA沉淀下來，12000 r/min離心10min；
(7)棄上清，加入1 mL 70％的乙醇洗滌，12000r/min離心15 min；
(8)棄上清，干燥，重溶于50uL的滅菌水。

[ Last edited by telomerase on 2007-12-17 at 23:07 ]

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1樓 2007-12-17 22:03:50

已閱回復此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

190582353

木蟲 (小有名氣)

應助: 0 (幼兒園)
金幣: 2028.5
散金: 10
帖子: 83
在線: 57.7小時
蟲號: 262835
注冊: 2006-07-01
性別: GG
專業(yè): 環(huán)境微生物學

我們也遇到了類似的問題，不過，總DNA出現(xiàn)多條條帶的現(xiàn)象只有一次，具體原因還不清楚，懷疑是提出了一些線狀質(zhì)粒。大家多多交流。

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回復此樓

2樓2007-12-29 16:17:44

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