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[交流]
關(guān)于細(xì)菌基因組DNA抽提的問題!!!
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各位大蝦,最近我提細(xì)菌基因組DNA出了問題,提出來后跑電泳是多條帶(見下圖),我以前一直都提得很好,方法和以前的一樣,可怎么提都是很多條帶,拜托各位幫我分析到底是什么原因,不勝感激! 方法:根據(jù)《新編分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指南》提供的方法進(jìn)行。 (1)培養(yǎng)5 mL的細(xì)菌培養(yǎng)物至飽和狀態(tài)，取1.5 mL的培養(yǎng)物10000 r/min，離心2 min； (2)沉淀物加入567uL的TE緩沖液，用吸管反復(fù)吹打使之重懸。加入3OuL 10％的SDS和3uL 20 mg/mL的蛋白酶K，混勻，于37℃ 溫育1h； (3)加入100uL 5 mol/L NaC1，充分混勻，再加入8OuL CTAB/NaCl溶液，混勻，于65℃ 溫育1Omin； (4)加入等體積的酚/氯仿/異戊醇，混勻，8 000r/min離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)入一個(gè)新管中； (5)加入等體積的氯仿/異戊醇，混勻，8 000r/min離心5 min，將上清移入一只新管中； (6)加人0．6體積的異丙醇，輕輕混合，室溫放置30min，直到DNA沉淀下來，12000 r/min離心10min； (7)棄上清，加入1 mL 70％的乙醇洗滌，12000r/min離心15 min； (8)棄上清，干燥，重溶于50uL的滅菌水。 [ Last edited by telomerase on 2007-12-17 at 23:07 ] |
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2樓2007-12-29 16:17:44
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