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稻草人的學(xué)習(xí)銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
胞外蛋白質(zhì)相互作用的方法 已有1人參與
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| 純化得到2種蛋白質(zhì)，其中一種是酶一種是輔助蛋白，怎樣做他們之間的相互作用？難道混合在一起看酶活怎樣？求高手指點(diǎn) |
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woai43
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| 體外相互作用可以采用GST-pull down的實(shí)驗(yàn)，將一個(gè)蛋白A與GST標(biāo)簽偶聯(lián)大腸桿菌純化，不需要谷胱甘肽洗脫。另一個(gè)蛋白B可以用his標(biāo)簽大腸桿菌純化，將兩個(gè)蛋白混合（加入BSA競(jìng)爭(zhēng)非特異性結(jié)合），通過離心GST beads將A蛋白離心于管底，B蛋白如與A有相互作用，則也能夠被拉下來，通過3-5次洗滌，SDS-PAGE，可考染也可WB分析。 |
9樓2013-11-27 10:57:13
jennifermatt
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2樓2013-11-20 17:08:35
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3樓2013-11-21 10:13:41
jennifermatt
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| 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。 其原理是：當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)x的抗體免疫沉淀x，那么與x在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)y也能沉淀下來。這種方法常用于測(cè)定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。 |
4樓2013-11-21 10:26:10
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